苯甲酸

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结构式：

分子式：C₇H₆O₂

相对分子质量：122．12

一、苯甲酸的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 10%三氯化铁溶液。

1．2 0．1mol／LNaOH溶液 按GB601配制。

2．操作方法

称取0．2g试样，加15mL0．1mol／LNaOH溶液，振摇过滤，滤液中加3滴三氯化铁溶液，即发生赤红色沉淀。

二、苯甲酸的含量测定

1．试剂和溶液

1．1 95%乙醇。

1．2 酚酞指示液1% 乙醇溶液，按GB603配制。

1．3 氢氧化钠 0．1mol／L溶液，按GB601配制和标定。

2．测定方法

称取0．25g试样(称准至0．0002g)，置于250mL锥形瓶中，加15mL对酚酞指示液显中性的95%乙醇，轻摇使试样溶解，加20mL新煮沸冷却的水，2滴酚酞指示液，以0．1mol／LNaOH标准溶液滴定至呈粉红色。

3．分析结果的表述

苯甲酸(G₇H₆O₂)质量分数(w)按式(10－1)计算：

式中 c——氢氧化钠标准溶液浓度，mol／L

V——滴定用去氢氧化钠标准溶液体积，mL0．1221——每毫摩C₇H₆O₂的质量，g／mol

m——试样质量，g

三、食品中苯甲酸、山梨酸的测定

(一)气相色谱法

1．原理

样品酸化后，用乙酸提取苯甲酸、山梨酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。测出苯甲酸、山梨酸量后，再分别乘以适当的相对分子质量比，求出苯甲酸钠、山梨酸钾量。

2．试剂和溶液

2．1 乙醚 不含过氧化物。

2．2 石油醚 沸程30～60℃。

2．3 盐酸 分析纯。

2．4 无水硫酸钠 分析纯。

2．5 盐酸(1+1) 取100mL盐酸，加水稀释至200mL。

2．6 40g／L氯化钠酸性溶液 于氯化钠溶液(40g／L)中，加少量盐酸(1+1)酸化。

2．7 苯甲酸标准溶液 精确称取50mg苯甲酸，加入丙酮溶解，定容至100mL，作为标准溶液，该溶液1mL含500μg苯甲酸。

2．8 山梨酸标准溶液 精确称取500mg山梨酸，加入丙酮溶解，定容至100mL，该溶液1mL含500μg山梨酸。

2．9 苯甲酸、山梨酸标准使用液 吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以丙酮稀释至每毫升相当于50μg，100μg，150μg，200μg，250μg苯甲酸、山梨酸。

3．仪器

气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。

4．测定方法

4．1 样品提取 称取2．5g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0．5mL盐酸(1+1)酸化，用15mL、10mL乙醚提取2次，每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性溶液(40g／L)洗涤2次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于10mL带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL丙酮溶解残渣，备用。

4．2 色谱参考条件。

4．2．1 色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长2m，内装涂以5%(m／m)DEGS+1%(m／m)H₃PO₄固定液的60～80目Chromosorb WAW。

4．2．2 气流速度：载气为氮气，50mL／min(氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件)。

4．2．3 温度：进样口230℃，检测器230℃，柱温170℃。

4．3 测定 进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。

同时进样2μL样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中苯甲酸的含量，g／kg

m₁——测定用样品液中苯甲酸的质量，μg

V₁——加入丙酮的体积，mL

V₂——测定时进样的体积，mL

m₂——样品质量，g

由测得苯甲酸的量乘以1．18，即为样品中苯甲酸钠的含量。

6．其他

在色谱图10－1中山梨酸保留时间为173s；苯甲酸保留时间为368s。本法可同时测定山梨酸、苯甲酸。

图10－1 气相色谱图

(二)高效液相色谱法

1．原理

样品加温除去二氧化碳和乙醇，调节pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

2．试剂和溶液

方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。

2．1 甲醇 优级纯，如果是分析纯，需重蒸。

2．2 稀氨水(1+1) 氨水加水等体积混合。

2．3 0．02mol／LCH₃COONH₄溶液 称取1．54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0．45μm)过滤。

2．4 20g／L碳酸氢钠溶液 称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。

2．5 苯甲酸标准储备液 准确称取0．1000g苯甲酸，加20g／L碳酸氢钠溶液5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg／mL，作为储备液。

2．6 苯甲酸标准使用液 吸取苯甲酸标准储备液10．0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸0．1mg／mL。经滤膜(0．45μm)过滤(同时测定山梨酸、糖精钠时，可加糖精钠、山梨酸标准储备溶液)。

图10－2 色谱图

3．仪器

高效液相色谱仪(带紫外检测器)。

4．测定方法

4．1 样品处理。

4．1．1 汽水、饮料、果汁类：汽水需微温搅拌除去二氧化碳，然后吸取2．0mL样品，加入已装有中性氧化铝(3cm×1．5cm)的小柱中，过滤，弃去初滤液，然后用移动相洗脱苯甲酸，接收于25mL带塞量筒中，洗脱至刻度。摇匀，此液通过微孔滤膜后进样。

4．1．2 配制酒类：称取10．0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调节pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜(0．45μm)过滤。

4．2 高效液相色谱参考条件。

4．2．1 色谱柱：YWG-C₁₈4．6×150mm5μm，或其他型号C₁₈柱。

4．2．2 流动相：甲醇+乙酸铵溶液(0．02mol／L)(5+95)。

4．2．3 流速：1．0mL／min。

4．2．4 进样量：10μL。

4．2．5 检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0．2AUFS。

根据保留时间定性、外标峰面积法定量。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中苯甲酸的含量，g／kg(L)

m₁——进样体积中苯甲酸的质量，mg

V₂——进样体积，mL

V₁——样品稀释总体积，mL

m₂——样品质量，g

6．其他

本方法可同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠。

(三)薄层色谱法

1．原理

样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸，山梨酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略定量。

2．试剂和溶液

2．1 异丙醇。

2．2 正丁醇。

2．3 石油醚沸程为30～60℃。

2．4 乙醚不含过氧化物。

2．5 氨水。

2．6 无水乙醇。

2．7 聚酰胺粉200目。

2．8 盐酸(1+1) 取100mL盐酸，加水稀释至200mL。

2．9 氯化钠酸性溶液(40g／L) 于氯化钠溶液(40g／L)中加少量盐酸(1+1)酸化。

2．10 展开剂。

2．10．1 正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)。

2．10．2 异丙醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)。

2．11 苯甲酸标准溶液 准确称取0．2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2．0mg苯甲酸。

2．12 山梨酸标准溶液 准确称取0．2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2．0mg山梨酸。

2．13 显色剂 溴甲酚紫－乙醇(50%)溶液(0．4g／L)，用氢氧化钠溶液(4g／L)调至pH8。

3．仪器

3．1 吹风机。

3．2 层析缸。

3．3 玻璃板10cm×18cm。

3．4 微量注射器10μL，100μL。

3．5 喷雾器。

4．测定方法

4．1 样品提取 称取2．50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0．5mL盐酸(1+1)酸化，用15mL，10mL乙醚提取2次，每次振摇1min，将上层醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性溶液(40g／L)洗涤2次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。吸取10．0mL乙醚提取液，分2次置于10mL带塞离心管中，在约40℃的水浴上挥干，加入0．10mL乙醇溶解残渣，备用。

4．2 测定。

4．2．1 聚酰胺粉板的制备：称取1．6g聚酰胺粉，加0．4g可溶性淀粉，加约7mL水，研磨3～5min，立即倒入涂布器内制成10cm×18cm，厚度为0．3mm的薄层板两块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。

4．2．2 点样：在薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1μL、2μL样品液，同时各点1μL、2μL山梨酸、苯甲酸标准溶液。

4．2．3 展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂(2．10．1或2．10．2)的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0．82、0．73)。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中苯甲酸或山梨酸的含量，g／kg

m₁——测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的质量，mg

m₂——样品质量，g

V₁——加入乙醇的体积，mL

V₂——测定时点样的体积，mL

10——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL

25——样品乙醚提取液总体积，mL