萝卜、植株和土壤中残留量检测方法(方法二)

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中国科学院上海昆虫研究所 徐乃旭 陈问达

样本用甲醇／水溶液提取，三氯甲烷液-液分配，活性炭／硅藻土柱层析净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转蒸发器

层析柱 Φ15mm×180mm

组织捣碎机

2．主要试剂

乙腈(HPLC纯)、甲醇、丙酮、石油醚、三氯甲烷(重蒸)、氯化钠，无水硫酸钠、弗罗里硅土、活性炭(黑色无定形粉末)、硅藻土(100～120目)

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 萝卜

称取50g样本，加100mL甲醇，组织捣碎。经装有5g助滤剂的布氏漏斗抽滤，再用50mL甲醇洗涤残渣，合并滤液。

3．1．2 植株

称取50g样本，加50mL蒸馏水和70mL甲醇，组织捣碎。经装有5g助滤剂的布氏漏斗抽滤，再用50mL甲醇洗涤残渣，合并滤液。

3．1．3 土壤

称取50g样本，用30mL蒸馏水润湿，加入70mL甲醇浸泡过夜。超声波提取15min，抽滤，再用50mL甲醇洗涤残渣，合并滤液。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将上述滤液的1／2(相当于25g样本)用旋转蒸发器减压蒸去甲醇后，移入分液漏斗中，加入5g氯化钠，用30mL石油醚振摇洗涤，弃去石油醚相。水相用20mL、20mL、10mL三氯甲烷萃取3次。合并三氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器减压浓缩至近干，加入约3mL甲醇溶解残余物，待柱层析净化。

3．2．2 柱层析净化

在层析柱中依次装入2cm无水硫酸钠、5g活性炭／硅藻土(1∶4，W／W)和2cm无水硫酸钠，用50mL甲醇预洗。将待净化样本移入柱中，用50mL甲醇和20mL40%丙酮甲醇溶液淋洗，弃去。再用80mL40%丙酮甲醇溶液洗脱。将收集的洗脱液用旋转蒸发器减压浓缩至近干，并加入3mL×3甲醇继续浓缩至近干，用乙腈定容后，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 270nm

色谱柱 BONDAPAK^TMC₁₈，300mm×3．9mm不锈钢柱

流动相 乙腈／蒸馏水(30∶70，V／V)

流速 1．0mL／min

进样量 20μL

保留时间 12．6min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 2×10^－9g。

最低检测浓度 萝卜0．02mg／kg，植株0．03mg／kg，土壤0．01mg／kg。

回收率 萝卜和土壤中添加吡虫啉0．05～2．00mg／kg时，平均回收率分别为86．2%～106．2%和82．1%～90．0%；植株中添加吡虫啉0．05～1．00mg／kg，平均回收率为82．0%～93．0%。见表1-21-7。

相对标准偏差 3．1%～12．1%，见表1-21-7。

表1-21-7 萝卜、植株和土壤中吡虫啉添加回收率及相对标准偏差实验结果