棉籽、植株和土壤中残留量检测方法(方法二)

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浙江省农业科学院农产品质量标准研究所 朱亚红 于志光

样本用甲醇提取，C₁₈柱净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

台式恒温振荡器

匀浆机

组织捣碎机

旋转蒸发器

恒温水浴锅(士2℃)

2．主要试剂

甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、盐酸、乙腈(色谱纯)、氯化钠SPE-C₁₈柱

吡虫啉标准品

3．检测步骤

3．1 提取

称取20g样本(土壤以干重计，棉叶10g、棉籽10g)。置于500mL平底三角烧瓶，用100mL甲醇浸泡，组织捣碎机捣碎，再浸泡1h，振荡30min，过滤。滤渣再用80mL甲醇振荡30min，过滤。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

合并滤液移至500mL分液漏斗中，加入100mL5%氯化钠溶液和100mL石油醚，振摇，静止分层。石油醚相用5%氯化钠溶液50mL反萃取1次，弃去石油醚相。合并水相，加入0．5mL6mol／L盐酸，摇匀，用40mL、40mL、20mL二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水，滤入500mL平底烧瓶，用旋转蒸发器减压浓缩至干。

3．2．2 柱净化

将SPE-C₁₈柱用10mL甲醇和去离子水依次预淋并至干。样本浓缩物用10mL石油醚／乙酸乙酯混合液(8．5∶1．5，V／V)分3次转移至柱上，淋出液弃去。用石油醚／乙酸乙酯混合液(3∶7，V／V)洗脱，收集10mL洗脱液，浓缩至干。用甲醇定容至10mL，待测。

3．3 高效液相色谱法测定

检测器 UV

波长 270nm

色谱柱 HP ODS，250mm×4mm×5μm

柱温 30℃

流动相 乙腈／水(40∶60，V／V)

流速 1mL／min

进样量 20μL

保留时间 4min22s

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1×10^－9g。

最低检测浓度 棉籽和植株均为0．05mg／kg，土壤0．02mg／kg。

回收率 棉籽、植株和土壤中添加吡虫啉0．1～5．0mg／kg时，平均回收率分别为85．4%～88．4%、77．7%～83．6%和85．9%～89．5%。见表1-21-9。

相对标准偏差 1．1%～10．1%，见表1-21

表1-21-9 棉籽、植株和土壤中吡虫啉添加回收率及相对标准偏差实验结果