重组DNA技术
又称基因工程。 将体外重组的DNA分子导入原核或真核细胞中增殖和表达的技术。重组DNA技术中应用的载体大多是经过改造的质粒或温和噬菌体。1972年美国伯格(P．Bery)等将病毒SV40的DNA与噬菌体P22的DNA连接在一起，构成第一批重组DNA分子；1973年美国科恩(N．Cohen)将不同的外源DNA插入质粒PSC101中，并导入大肠杆菌中，开创了遗传工程的研究。重组DNA技术通常分4个步骤：
❶ 取得重组DNA片段；
❷ DNA片段和载体连接；
❸ 将重组DNA分子导入宿主细胞；
❹ 通过遗传学、免疫学或分子杂交方法选出含有所需要的重组DNA分子的宿主细胞。在构建重组DNA分子和选择宿主细胞时，要求外源基因在宿主细胞中必须能准确地转录和转译，所产生的蛋白质在宿主细胞中不被分解，要使外源基因能在宿主细胞中表达。 |