细胞冻存cell cryopreservation

在超低温冷冻状态下长期保存细胞的方法。细胞生化活动的速率与绝对温度呈正比，在-176℃的超低温下，细胞呈休眠状态，因而能长期保存。细胞在冷冻时，常因溶液中电解质浓度增高和冰晶形成而受到损伤，故冻存细胞须悬浮于无毒、低分子量、高溶解度，并能迅速透入活细胞内的特定保护剂中，如甘油、二甲亚砜、聚烯吡酮、葡萄糖等，其中前两种最常用。冷冻过程中的降温速度对冰晶形成有重大影响，冷冻速度太快，则细胞外结冰时，细胞内水分来不及渗出胞外，以致在胞内形成冰晶，损伤细胞； 如冷却过慢，则细胞外溶液结冰，时间过长，引起细胞内水分大量渗出，细胞收缩死亡。适中的降温速度是每分钟1℃，降至-70℃后，立即投入液氮罐使速冷至-176℃，可耐长期保存。保存期间需定期补充液氮，使罐内维持低温，并使细胞不致露出液氮面。
实际操作时，取对数生长期的细胞，在冻存前24小时换液一次，用机械冲刮或酶消化收集细胞，低速离心，取沉淀细胞，冲散在少量培养基中，进行计数后定量加入含有抗冷冻剂 (10～15%甘油或10%二甲亚砜) 的培养液，再分装于特别厚壁的小安瓿瓶或小塑料管中，在火焰中封口或加塞后，装入纱袋中，夹层置一铅块，使纱袋能沉入液氮中，用细蝇一端扎紧纱袋，一端系上标签置于液氮罐外。亦可将细胞瓶放入特制的另一罐内，挂在液氮中，控制降温速度。如无特制的降温仪，可将细胞瓶放在泡沫塑料盒内，置-70℃冰箱2小时，再投入液氮中。也可将其放在普通冰箱的冰盒中结冻过夜，次日放在液氮罐口20分钟，然后迅速投入液氮。
细胞复苏时，需先准备37～39℃的水浴锅，从纱袋或吊罐中取出安瓿瓶立即投入温水中，使速融，吸出细胞悬液移入10ml预温的生长液中，冲吸均匀后低速离心，取沉淀细胞接种于培养瓶中，37℃静置培养24小时后检查，如已贴壁，即可换液，以后按常规方法培养。
细胞冻存主要是为科研或生产保存细胞系或细胞株，以避免在实验室长期传代中引起变异或意外丢失，制备单克隆抗体的骨髓瘤细胞和融合后的杂交瘤细胞均需应用液氮保存。此外，在医学上用于自体或异体移植的骨髓细胞、肝细胞、胰腺细胞等； 在畜牧业上，用于人工授精和胚胎移植的冷冻精液和冻胚； 水产业中用的鱼、虾、蟹的精子和受精卵，以及昆虫的精子和受精卵等均可应用液氮保存或在低温中长途运输。

细胞冻存cell cryopreservation

将细胞置于超低温冷冻状态下保存的方法。细胞生命活动的强度在一定范围内与绝对温度呈正比，在-176℃的超低温下，细胞呈休眠状态，因而能长期保存。为避免细胞在冷冻时电解质浓度增高和形成冰晶受到损伤，冻存细胞常悬浮在无毒、低分子量、高溶解度，并能迅速透入活细胞内的特定保护剂中，如甘油、二甲亚砜、聚烯吡酮、葡萄糖等。适当的降温速度为每分钟1℃，降至-70℃后，立即投入液氮罐使速冷至-176℃，可长期保存。细胞冻存主要是为科研或生产保存细胞系或细胞株，避免在实验室中长期传代引起变异或意外丢失。