淋巴细胞转化试验

测定人体淋巴细胞数的一种方法。利用形态学检测法测得人体PHA刺激淋巴细胞转化率为60%～75%；利用³H—TDR掺入法，参考值无可用资料，每批试验应设对照组，计算刺激指数(SI)值。SI=实验组cpm值/对照组cpm值，SI>2为有意义。T淋巴细胞转化率增高见于Down综合征。

淋巴细胞转化试验lymphocyte transformation test

系检查淋巴细胞功能的一种试验。正常人体的T淋巴细胞在体外培养过程中，受到特异性抗原或有丝分裂原（植物血凝素或刀豆素等）刺激，可转化成淋巴母细胞。如细胞免疫缺陷时，转化率降低，乃至无此种转化现象；患恶性肿瘤或某些其他疾病此种转化功能也降低。临床常用植物血凝素(PHA)作为分裂原检测淋巴细胞转化功能(称PHA刺激淋巴细胞转化试验)。此试验可反映出机体细胞免疫功能水平，被作为主要免疫指标之一。

淋巴细胞转化试验

淋巴细胞转化试验广义的讲是指在体外培养过程中测定T或B淋巴细胞受到特异性抗原或有丝分裂原刺激后转化为淋巴母细胞或浆母细胞的百分率的一种方法，临床上可用以检测细胞免疫或体液免疫功能。但因缺乏适用于人的对B细胞特异的有丝分裂原，所以临床所指的淋巴细胞转化试验仅限于T淋巴细胞，用的是T淋巴细胞刺激物，反映的是细胞免疫功能。试验方法多采用3H胸腺嘧啶核苷掺入法和形态学检查法。这两种方法一般都是以植物血凝素(PHA)或刀豆素A作为刺激物。
³H-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法： T淋巴细胞受PHA刺激后，转化为淋巴母细胞时，需摄取核苷以合成脱氧核糖核酸。在细胞培养液中掺入³H-TdR，经培养后，测定淋巴细胞摄取放射性核素的量，作为淋巴细胞转化的指标。方法是取一定量的淋巴细胞置于含有PHA的培养液中，经培养，使T淋巴细胞在PHA作用下向淋巴母细胞转化，再加入³H-TdR继续培养，使转化中的细胞摄取标记的核苷，然后离心，以消化沉淀物，将消化液置测样杯中，用液体闪烁计数器测定其每分钟脉冲数，以每百万淋巴细胞的每分钟脉冲数 (cpm/10⁶淋巴细胞)表示。脉冲数愈高，说明淋巴母细胞形成愈多。亦可用加PHA的cpm与不加PHA的cpm的比值，即刺激指数(SI)来表示。由于所用的试剂、方法、操作技巧和液体闪烁计数器的不同，测得的结果可有很大差别，故该法无统一正常值，各实验室都是根据自己的条件建立正常值。
形态学法： 取一定量的淋巴细胞，置于含有PHA的培养液中，经72h培养，然后离心，取沉淀物涂片，用Giemsa液染色，在光镜下查看500个淋巴细胞，按下式计算其中转化为淋巴母细胞的百分数：

转化的淋巴母细胞在形态上的特点是： 细胞体积比原来的小淋巴细胞大3～4倍，直径约20～30μm，核也增大，核膜清晰，核染色质网疏松、纤细，有1～3个清楚的核仁，胞浆丰富，有伪足样突起，嗜碱，核周围有淡染区，胞浆内有小空泡。除以上典型淋巴母细胞外，尚可见到介于成熟与母细胞之间的过渡型淋巴细胞，直径10～20μm，有明显的核仁，胞浆染色稍偏碱。此法因缺乏对细胞转化形态的统一判定标准，故各地报告的正常值存在一定差别。正常人的淋巴细胞转化率约为50～70%，青壮年稍高于老年人。
上述的PHA淋巴细胞转化试验能反映血中T淋巴细胞的质与量，转化率低表示有原发性和继发性的细胞免疫缺陷和功能低下，见于先天性胸腺发育不全综合征、胸腺无能综合征、大量长期应用免疫抑制剂及运动失调性毛细血管扩张症、何杰金病、淋巴瘤、癌瘤、干燥综合征、慢性消耗性疾病和自身免疫性疾病如系统性红斑狠疮等。此试验对于估计恶性肿瘤的预后有一定意义，特别是淋巴系统肿瘤，经治疗后如转化率上升，病人的存活时间可较长，反之则较短。器官移植后如出现排异反应，转化率多上升。Down综合征时转化率增高，对正常人不起作用的极微量PHA即可刺激患者的淋巴细胞发生转化。此试验也可用作观察免疫增强剂和免疫抑制剂治疗的指标，由于免疫功能存在着个体差异，治疗效果应以自身水平的升降作对比。

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淋巴细胞转化试验

淋巴细胞转化试验是测定机体细胞免疫功能的体外测定方法之一。其原理为T细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原(如植物血凝素、美洲商陆等)，或受到特异性抗原(如结核菌素、纯蛋白衍化物、细菌内毒素等)刺激后，可转化为淋巴母细胞，并进行有丝分裂。这种转化的淋巴母细胞，不仅呈现出不成熟的母细胞形态(胞体增大、细胞质丰富、细胞核内核仁清晰可见等)，以及蛋白质和核酸合成的增加，而且还合成并释放出淋巴毒素、游走抑制因子等淋巴因子。目前常采用形态学方法判定淋巴细胞转化率，或以氚 (³H)标记胸腺嘧啶掺入量的增加，说明淋巴细胞的转化率。
淋巴细胞转化试验可用于测定结核病、布鲁菌病、慢性肝炎等病人的细胞免疫功能，以及判断肿瘤的疗效和预后。常用方法如下。
植物血凝素淋巴细胞转化试验 取病人血液，加入肝素抗凝，分离出白细胞，加入植物血凝素作细胞培养，72小时后涂片染色，在显微镜下观察200个淋巴细胞，计算其中转化的淋巴母细胞的百分比，按下式计算：

植物血凝素淋巴细胞转化试验为非特异性的试验，其转化率的高低只反映病人总的细胞免疫情况。在体外细胞培养时，外周血中的淋巴细胞70%以上转化为淋巴母细胞。
涂片法计算细胞费人力和时间，且影响判断结果的因素较多。因此也可在终止培养前24小时，以氚标记胸腺嘧啶加于培养物中，当淋巴细胞转化为母细胞时，其核摄取氚胸腺嘧啶的量大为增加，应用液体闪烁计数器测定细胞中同位素的掺入量。此法较涂片法更为简便。
纯蛋白衍化物淋巴细胞转化试验 方法同上，只是以特异性抗原纯蛋白衍化物代替植物血凝素，刺激被结核菌蛋白致敏过的T细胞转化。其转化率不如植物血凝素高，一般为5～30%。此转化率既能反映机体的总的细胞免疫功能，又可反映机体对这种特异性抗原的细胞免疫状况。

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淋巴细胞转化试验

淋巴细胞体外培养时加入非特异刺激物 (植物有丝分裂素，如植物血凝素PHA)或特异性抗原，可刺激淋巴细胞发生形态学变化，向母细胞转化，脱氧核糖核酸和蛋白质的合成增加，称为淋巴细胞转化反应。
加入的刺激物不同，淋巴细胞转化试验的意义也不同。一般认为： PHA和刀豆蛋白(ConA)主要刺激T淋巴细胞转化； 美洲商陆刺激素(PWM)既可刺激T淋巴细胞，又可刺激B淋巴细胞转化。以上有丝分裂素刺激的淋巴转化为非特异性淋巴反应，反映机体的一般细胞免疫状态。应用特异性抗原作为刺激物则刺激已致敏的淋巴细胞转化，反映机体的特异性免疫功能。
检测淋巴细胞转化试验的方法很多。如直接镜检法、H-胸腺嘧啶掺入法和放射自显影计数法等。 前两种方法在国内应用较广。直接镜检法不需要特殊仪器，便于推广，但易受主观因素影响，应注意掌握试验条件和技术； 同位素法检测效率高，用血量小，如使用得当，误差小，但需特殊设备和器材。各有利弊，目前在肾脏病学领域中，淋巴细胞转化试验主要用于发病机制的研究：
❶某些免疫性肾脏疾病对特异性抗原的淋巴转化率显著高于正常。如部分原发性肾小球肾炎患者用肾抗原测得的淋巴转化率增高，说明这些患者体内存在肾抗原致敏的淋巴细胞。
❷某些肾病，如慢性肾炎及尿毒症患者外周血用PHA刺激的淋巴细胞转化率较正常对照低，反映这些患者T细胞功能减退。有人认为这种低下反应是体液抑制因子作用的结果。
❸肾移植排异反应时，PHA刺激的淋巴细胞转化率可能增高。
在评价非特异淋巴细胞转化反应的意义时，必须注意排除生理（如年龄等）及其它病理（如感染等）的影响。细胞毒药物和其它某些药物的使用亦可影响淋巴细胞转化反应。