(5)苹果和土壤中残留量检测方法

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农业部环境保护科研监测所 黄士忠 李治祥 凌联银 王继军

样本中的丁硫克百威及其代谢物用甲醇提取，二氯甲烷液-液分配，水解，羟基乙基化反应，气相色谱法(NPD)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

振荡器

匀浆机

旋转蒸发器

恒温水浴锅

2．主要试剂

甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、无水硫酸钠、氯化钠

缓冲溶液称49．25g磷酸氢二钾和4．65g磷酸二氢钾溶于蒸馏水，定容至2000mL

丁硫克百威标准品、克百威标准品、3-羟基克百威标准品

3．检测步骤

3．1 土壤中丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威的提取和净化

3．1．1 提取

称取20g土壤，置于300mL具塞三角瓶中，加入8mL缓冲液、10mL水和80mL甲醇，浸泡过夜，振荡提取1h，抽滤。用60mL甲醇分3次洗滤渣。

3．1．2 净化

合并滤液于500mL分液漏斗中，加入150mL水和50mL饱和氯化钠溶液，用50mL、50mL、40mL二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥后，滤入250mL平底烧瓶中，用旋转蒸发器(65℃)减压浓缩近干，用丙酮定容，测定丁硫克百威及克百威。

3．1．3 羟基乙基化反应

将剩余的丙酮定容移入250mL平底瓶中浓缩至近干，用3mL乙酸乙酯溶出。加入10mL无水乙醇和2滴浓盐酸，在95℃水浴中回流45min，立即用冰水冷却。用100mL0．25mol／L盐酸(1～2℃)冲洗冷凝器，将全部溶液移入500mL分液漏斗中，用50mL、50mL、40mL二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器(65℃)减压浓缩至近干，用丙酮定容，测定3-羟基克百威。

3．2 苹果中丁硫克百威和克百威的提取和净化

3．2．1 提取

取30g苹果匀浆样本，放入300mL具塞三角瓶中，加10mL缓冲液和80mL甲醇浸泡过夜，振荡提取1h，抽滤。用60mL甲醇分3次洗滤渣。

3．2．2 净化

同土壤(3．1．2)。

3．3 苹果中3-羟基克百威的提取和净化

3．3．1 水解提取

取30g苹果匀浆样本，放入300mL具塞三角瓶中，加30mL浓盐酸和70mL水，置95℃水浴中加热1h，抽滤。

3．3．2 液-液分配

将滤液移入500mL分液漏斗中，加入0．5mL4%十二烷基磺酸钠和20g氯化钠，用50mL、50mL、40mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥后，滤入250mL平底烧瓶中，用旋转蒸发器(65℃)浓缩近干，用3mL乙酸乙酯溶出。

3．3．3 羟基乙基化反应

同土壤(3．1．3)。

3．4 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 1m×2mm玻璃柱，固定相：测定丁硫克百威用1．2%OV-17+2．0%OV101／ChromosorbWHP80～100目；测定克百威和3-羟基克百威用5%OV-17／ChromosorbQ80～100目。

检测温度 柱温240℃；进样口265℃；检测器285℃(丁硫克百威)

柱温221℃；进样口258℃；检测器275℃(克百威)

柱温230℃；进样口260℃；检测器280℃(3-羟基克百威)

载气 高纯氮，35mL／min

燃烧气 空气96mL／min，氢气4．5mL／min。

进样量 1～2μL

保留时间 丁硫克百威3min，克百威1．5min，3-羟基克百威2min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 丁硫克百威2．5×10^－11g，克百威1．6×10^－11g，3-羟基克百威7．4×10^－9g。

最低检测浓度 苹果中丁硫克百威0．004mg／kg，克百威0．003mg／kg；3-羟基克百威0．01mg／kg；土壤中丁硫克百威0．006mg／kg，克百威0．004mg／kg，3-羟基克百威0．02mg／kg。

回收率 土壤、苹果中添加丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威0．2～1．0mg／kg时，丁硫克百威在土壤中平均回收率为97．0%～100．3%，在苹果中为93．6%～95．3%；克百威在土壤中平均回收率为95．8%，苹果中为89．5%～97．2%；3-羟基克百威在土壤中平均回收率为90．5%～96．1%，苹果中为92．7%～95．3%。见表1-6-10。

相对标准偏差 1．6%～5．0%，见表1-6-10。

表1-6-10 土壤和苹果中丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威添加回收率及相对标准偏差实验结果