双波长薄层扫描法
双波长薄层扫描法系指薄层分离后用双波长薄层扫描仪对斑点进行直线或曲折扫描。 或进行透射光法、反射光法及荧光法的测定。其原理是与双波长分光光度法相同。 双波长测定法可消除薄层厚度不均匀引起的误差，使测量基线平稳。 选择样品有最小吸收度的波长为参比光束波长入R，选择样品有最大吸收度的波长为样品测定光束波长入s，这样灵敏度高些。 薄层板上的斑点是不规则的，直线扫描不能消除斑点不规则的影响：曲折扫描(锯齿形扫描)可消除斑点不规则的影响。 在进行标定时，工作曲线一般不是直线，双波长TLC扫描仪有工作曲线线性化装置，使得曲线被补偿为直线，以校正由干斑点大小不同及展开距离不同引起的积分值误差。 对于有紫外光吸收的样品斑点，不必进行显色，可以直接测量紫外光的反射与透射。一般采用反射光法。透射光法所引起的误差大。 例如：健腰丸中补骨脂素、绿原酸的测定，样品经提取处理后，用硅胶G薄层板，苯－石油醚－乙酸乙酯(42：25：9．8)展开后，用CS－930薄层扫描仪，补骨脂素测定波长为305nm，参比波长370nm；绿原酸测定波长为324nm，参比波长220nm，分别扫描，用标准曲线法测得结果满意。 |