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利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌的目的。将需灭菌物品放入流通蒸气灭菌器内，100℃15～30min，杀死其中的繁殖体，取出后放37℃孵箱过夜，使芽孢发育为繁殖体，次日再蒸一次，如此反复3次以上，可达灭菌效果。此法适用于一些不耐高温的含糖、牛奶等培养基。
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