血清乳酸脱氢酶及乳酸脱氢酶同工酶测定

乳酸脱氢酶(LDH,LD)属糖酵解酶，泛存在于各种组织细胞的胞浆中，以心、骨胳肌、肾最为丰富，其次为肝、脾、胰、红细胞和白细胞等，正常人血清中也含有此酶。它有在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(辅酶I,NAD)的参与下，催化乳酸与丙酮酸之间可逆反应的作用。多数组织中酶活性远比血清高，所以即使少量组织坏死，也能使血清LDH活性增高。
LDH是由生物活性和分子量相同，但结构和等电点不同的五种同工酶组成，每种同工酶是由亚基H或M单独组成或二者搭配组成的四聚体，可用电泳法使这五种同工酶分开。向阳极移动最快的称LDH₁，其后依次为LDH₂、LDH₃、LDH₄，近阴极处者为LDH₅。它们的其它理化性质也有差别，如由LDH₁至LDH₅对热、尿素或丙酮处理的稳定性逐渐减低，与α-羟丁酸的亲和力和受亚硫酸盐的抑制逐渐减小。
测定血清LDH的方法主要有二：
❶分光光度法： 其用还原型辅酶I (NADH)在340nm处有一吸收峰，用紫外分光光度计测定NADH的消光值，确定LDH活性；
❷2,4-二硝基苯肼比色法： 以左旋乳酸为底物，它在辅酶I的参与下经LDH的水解作用产生丙酮酸，再加入2,4-二硝基苯肼，生成棕红色的丙酮酸二硝基苯腙，与已知浓度的丙酮酸标准液对比，可求得LDH活性。此法以100ml血清中的LDH在37℃与底物作用15min，能产生1μmol的丙酮酸者为一个LDH活性单位。正常值： 血清为166～340u/dl。因LDH存在于很多组织中，LDH总活性测定不能特异地反映某一组织或器官的情况。为进一步了解某一器官的病变，还需加做同工酶测定。LDH同工酶的测定是以淀粉、琼脂或乙酸纤维素膜为支持物，先用电泳法将五种成分分开，然后以乳酸钾或钠为基质，在辅酶I的参与下用这五种成分进行酶反应。在生成丙酮酸的同时，辅酶I也还原为NADH，它再经吩嗪二甲酯硫酸盐将氢传递给氯化硝基四氮唑蓝，使之还原为紫蓝色化合物，然后以光密度计定量，求得LDH₁～LDH₅活性的百分比。正常值LDH₁17～27%,LDH₂ 27～37%,LDH₃ 18～25%,LDH₄ 3～8%,LDH₅0～5%。根据LDH百分比的改变，可以进一步了解增高的LDH来源于何组织或器官。乳酸脱氢酶同工酶的命名、组成与组织含量见下表：

乳酸脱氢酶同工酶命名、组成与组织含量

命名 (从阳极依 次命名)	单体成分	组织中乳酸脱氢酶含量
		心肌	肝	骨胳肌	脑肾	红细胞
LDH1 LDH2 LDH3 LDH4 LDH6	HHHH HHHM HHMM HMMM MMMM	++++ ++++ + ± ±	± ± + ++ ++++	± ± + ++ ++++	++ + ++ + ++ ++ ++ ++ ± ++	+++ +++ + ± ±

以“+”多少代表乳酸脱氢酶含量高低 ±表示几乎无乳酸脱
氢酶活性 H为心肌性单体 M为骨胳性单体

正常情况下，乳酸脱氢酶在新生儿最高，约为成人的两倍，随年龄的增长逐渐降低，到14岁时趋于恒定。在组织缺氧情况下，由于细胞膜的通透性增加，导致酶从细胞内释放入血，故血清中LDH明显上升。心肌梗塞时，LDH活性明显增加，而且历时较肌酸磷酸激酶(CPK)、谷-草转氨酶(GOT)为长。肝脏急性损害、肝癌、肌肉损伤、溶血性贫血、巨幼红细胞性贫血、恶性肿瘤、白血病等，都可使血清中LDH活性增高。血清中LDH同工酶活性的正常值，各作者报告有一定差别，一般规律是LDH₂>LDH₁>LDH₃>LDH₄>LDH₅。心肌梗塞时LDH₁增加且LDH₂/LDH₁<1。急性心肌炎、溶血性贫血、白血病和淋巴瘤时，LDH₁增加；急性肝炎或肝癌时LDH₅增加，超过LDH₄; 而阻塞性黄疸时LDH₄和LDH₅都增加，但LDH₄增加显著。充血性心力衰竭失代偿期、肌肉大面积损伤时，LDH₅增加。