棉籽、植株和土壤中残留量检测方法

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天津市农业科学院中心实验室 郭永泽 张玉婷 刘凤来 宋淑荣 石守良

棉叶和土壤用乙腈提取；棉籽用乙腈／去离子水提取。碱性氧化铝柱层析净化，高效液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转蒸发器

空气浴振荡器

样品粉碎机

2．主要试剂

乙腈(重蒸)、正己烷(重蒸)、甲醇(重蒸)、二氯甲烷(重蒸)、氯化钠、无水硫酸钠

碱性氧化铝200目，130℃烘5h，加5%水减活

噻苯隆(TDZ)标准品、噻苯隆异构体(P-TDZ)标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 棉籽

称取10g样本于三角瓶中，加150mL乙腈，静置过夜，振荡提取1h，抽滤并洗涤。提取液减压浓缩(40±5℃)至40～50mL。

3．1．2 棉叶和土壤

称取10g棉叶样本(土样20g)于三角瓶中，加150mL乙腈／去离子水(80∶20，V／V)，静置过夜，振荡提取1h，抽滤并洗涤。提取液减压浓缩(40±5℃)至40～50mL。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

3．2．1．1 棉籽

将提取浓缩液转移至500mL分液漏斗中，用50mL正己烷洗涤三角瓶并转移至分液漏斗中，振摇洗涤1min，收集下层乙腈相。正己烷再用25mL乙腈，振摇1min。合并乙腈，用旋转蒸发器(40±5℃)减压浓缩至近干，待净化。

3．2．1．2 棉叶和土壤

将提取浓缩液转移至500mL分液漏斗中，加入50mL饱和氯化钠溶液，用50mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩至近干。将浓缩残留物用100mL乙腈溶解并转移至分液漏斗中，加入50mL正己烷，振摇洗涤1min，收集下层乙腈相。正己烷相用25mL乙腈，振摇1min。合并乙腈相，用旋转蒸发器(40±5℃)减压浓缩至近干，待净化。

3．2．2 柱层析净化

在层析柱中依次装入2cm无水硫酸钠、15g碱性氧化铝和2cm无水硫酸钠，用10mL甲醇预淋。将浓缩残留物用10mL甲醇溶解并转移至柱中，用150mL甲醇洗脱。收集全部洗脱液，用旋转蒸发器(40±5℃)减压浓缩至近干，用甲醇定容，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 290nm

色谱柱 C₁₈柱，250×4．6mm，5μm

柱温 30℃

流动相 乙腈∶水(55∶45，V／V)

流速 1mL／min

进样量 10μL

4．计算结果

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 噻苯隆(TDZ)1．07×10^－9g，异构体(P-TDZ)1．42×10^－9g。

最低检出浓度 噻苯隆(TDZ)：棉叶、棉籽0．021mg／kg，土壤0．011mg／kg；异构体(P-TDZ)：棉叶、棉籽0．028mg／kg，土壤0．014mg／kg。

回收率 棉叶、棉籽、土壤中添加TDZ和P-TDZ0．05～5．00mg／kg时，平均回收率分别为85．0%～95．7%和84．0%～93．3%。见表3-37-1。

相对标准偏差 2．2%～6．6%，见表3-37-1。

表3-37-1 棉花植株、土壤和棉籽中噻苯隆和噻苯隆异构体添加回收率及相对标准偏差实验结果