胚胎保存embryo storage将家畜、人和动物的早期胚胎置于低温条件下贮存的技术。使其停止发育,当需要时再升温进行移植。如牛、绵羊、山羊和人胚胎进行冷冻后贮存,解冻仍能存活,受胎率为20%~40%。在磷酸缓冲溶液(PBS)内加入0.25 mol/L、0.5 mol/L、0.75 mol/L、1.0 mol/L、1.25 mol/L和1.5 mol/L的二甲基亚砜(DMso)。胚胎在冻前依次从低到高浓度的DMso的PBS溶液内放5~10 min,之后缓慢控制降温。由室温降至—7℃,每分钟降1℃至—7℃时诱发结冰;然后每分钟降0.3℃速度降至—36℃;再每分钟降0.1℃速度降至—60℃,即可直接投入液氮(—196℃)中。需用时采取缓慢升温法由液氮温度升至—50~—60℃时不要控制温度,随后以每分钟上升4~5℃升至—10℃,最后升至室温。常温胚胎要洗去其DMso,即按上述相反方向依次放到含不同浓度DMso的PBS液中,最后移至不含DMso的PBS溶液内待用。 |