真菌检查

真菌包括霉菌、酵母菌和酵母样菌。虽然放线菌属、奴卡菌属和链丝菌属不属于真菌，但类似真菌，它们引起的各种疾病通常列入真菌性疾病，故将这些菌属的检查列入本条内。其检查方法如下：
显微镜直接检查 (1)标本采集： 检查真菌的标本，可用毛发、皮屑、甲屑及其他易受感染的组织。所采标本应为未经治疗过的感染物，否则易有假阴性。头癣要采折断的病发； 体癣要刮取皮损边缘鳞屑； 甲癣要用刀刮取甲下层小碎屑；疑有放线菌病，要采集硫磺颗粒。所取标本尽可能多些，以便复查或培养，提高阳性率。
(2)制片：将标本少许置载片上，加5～10%氢氧化钾或含5%氢氧化钾的25%甘油溶液一小滴，以溶解角质，加盖片。若检查新型隐球菌、皮炎芽生菌、巴西奴卡菌等，可用生理盐水代替碱性溶液。检查新型隐球菌及其他有荚膜的孢子真菌，可加一滴印度墨汁。检查浅部真菌病标本，一般不需染色。
(3)镜检：毛发、皮屑、甲屑是浅部真菌感染，属皮肤丝状菌，可分为毛癣菌属，小孢子菌属和表皮癣菌属等三类的几十种真菌，镜下形态，因菌种不同而异。人体内脏或深部的真菌感染，多属深部真菌，如白色念珠菌、放线菌、新型隐球菌、孢子丝菌及着色霉菌等，常可在痰、尿、粪、脑脊液及其他腔道分泌物中检出。
培养检查 除花斑癣菌、鼻孢子菌外均能培养。培养基种类繁多，不同真菌所需培养基不完全相同。常用的培养基有葡萄糖蛋白胨培养基、吐温80玉米琼脂培养基和血液琼脂培养基等。分离致病真菌时，一般在葡萄糖蛋白胨培养基中加入对真菌生长无抑制作用，而又耐热的氯霉素。可于斜面培养基试管中，分别接种标本2～4处，置于37℃培养，逐日观察其生长情况。一般皮肤癣菌，平均在7～10d方开始生长。深部真菌，包括荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌和粗球孢子菌等，生长也较缓慢。应观察其菌落形态及大小，生长的繁茂程度，菌落的边缘和下沉现象，菌落的结构和颜色等。致病菌一般色淡，多呈白色或奶油色。在显微镜下观察菌丝和孢子结构，大多数真菌能呈现本属的特点。用透明胶布有粘性的一面，与真菌菌落的表面轻轻接触，然后固定在有一滴乳酸棉蓝染色液的玻片上，即可在镜下观察到菌落中自然排列状况。 致病菌的菌丝很小，而菌等条件致病菌的菌丝，介于藻菌与致病菌之间。观察菌丝时，可见到单纯菌丝、球拍菌丝、梳状菌丝、螺旋菌丝、结节菌丝、关节菌丝、鹿角菌丝及假菌丝等。孢子方面，可见到芽生孢子、厚壁孢子、关节孢子、大分生孢子、小分生孢子、孢子囊孢子、卵孢子、接合孢子、子囊孢子及担孢子等。此外各种条件致病菌，尚具有特殊的分生孢子柄。对真菌鉴定时，根据生长速度，菌落形态、菌丝、孢子和孢子柄的特点，基本上可以作出诊断。必要时还须做小培养，进行观察。
在分离培养时，如系非致病性污染真菌，其特点是：多数生长速度快，3～4d即充满试管斜面；非致病菌污染的真菌适宜在室温下生长，生长多在培养基表面，很少有下沉现象；颜色鲜明，有红色、黄色、蓝色、黑色或绿色等色彩；菌落形态不规则，菌丝和孢子结构比较复杂，可见各种有性或无性孢子。有人认为非致病性的真菌，也可能在机体免疫功能降低的病人中产生严重的甚至是致死的感染，所以应视为潜在的致病菌。 菌中的黄菌、黑菌、小巢菌及花斑菌，均为条件致病菌，可引起皮肤、耳、鼻窦、眼、肺、心脏、骨、脑等病变，统称菌病。 菌具有抗原性，反复吸入，可引起支气管哮喘。 黄菌、黑菌等产生毒素，能引起肝、肾、神经损伤和致癌作用。毛霉菌，可引起毛霉菌病或称藻菌病，糖尿病患者易得此病，主要侵犯血管，引起血栓，往往致死。
由于广泛应用肾上腺皮质激素、抗生素、免疫抑制剂等药物，真菌性感染日渐增多，其中以念珠菌属、隐球菌属和毛孢子菌属较多见。酵母菌被认为是口腔、消化道、阴道的正常菌群，若在血液、脑脊液或其他正常无菌体液中分离出酵母菌，或从同一病人的多次连续所采标本中分离出酵母菌，或从临床上疑为真菌感染的病人中分离出酵母菌，应结合临床，确定其意义。一般实验室通过尿素酶试验和芽管试验，就可将新型隐球菌及白色念珠菌筛选出来；如尿素酶试验阳性，提示为新型隐球菌，再用印度墨汁观察其荚膜；如淀粉样化合物试验也为阳性，37℃培养生长良好，即可诊断为新型隐球菌。仅在室温下生长，则为其他隐球菌。尿素酶试验阴性，在无菌的正常人血清试管中培养3h后，单个酵母细胞长出芽管，并在吐温80玉米琼脂上有厚膜孢子形成者为白色念珠菌。尿素酶试验和芽管试验均为阴性的可疑酵母样菌，可定为酵母样菌。