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两条引物使用不同的浓度,一般以50∶1~100∶1的比例加入反应液中,其中低浓度引物通常为0.5~1.0pmol/L。在PCR前25个循环中,主要生成双链DNA产物,当低浓度引物逐渐耗尽时,高浓度引物介导的PCR反应就会产生大量单链DNA,分离该扩增产物DNA可直接测定序列。采用不对称PCR技术制备单链DNA更方便、快捷。参见“聚合酶链反应”。
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