染色法、培养基和试剂

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(一)革兰氏染色液的配制及染色法

(1)染色液：结晶紫染色液：1g结晶紫溶解于20mL乙醇溶液(95%)中，然后与80mL草酸铵(1%)溶液混合。

革兰氏碘液：将1g碘与2g碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

沙黄复染液：将0．25g沙黄溶解于10mL乙醇(95%)中，然后用90mL蒸馏水稀释。

(2)染色法：将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染色1min水洗，滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗，滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗，滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。

(3)结果：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。

(二)生化试验培养基和试剂

1．糖发酵管

(1)成分：

牛肉膏 5g 0．2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL

蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL

氯化钠 3g 葡萄糖 0．5%

磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O) 2g (pH7．4)

(2)制法：按上述成分配好后，按0．5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min，其他各种糖发酵管，可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min，另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌，将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

(3)说明：蔗糖不纯，加热后会自行分解者，应采用过滤法除菌。

2．西蒙氏柠檬酸盐琼脂

(1)成分：

氯化钠 5g 琼脂 20g

硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 0．2g 蒸馏水 1000mL

磷酸二氢铵 1g 0．2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL

磷酸氢二钾 1g (pH6．8)

柠檬酸钠 5g

(2)制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后，加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。

3．葡萄糖铵琼脂

(1)成分：

氯化钠 5g 琼脂 20g

硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 0．2g 蒸馏水 1000mL

磷酸二氢铵 1g 0．2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL

磷酸氢二钾 1g (pH6．8)

葡萄糖 2g

(2)制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。

4．氨基酸脱羧酶试验培养基

(1)成分：

蛋白胨 5g 1．6%溴甲酚紫－乙醇溶液 1mL

酵母浸膏 3g L－氨基酸或DL－氨基酸

葡萄糖 1g 0．5g／100mL或1g／100mL

蒸馏水 1000mL (pH6．8)

(2)制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种L－或DL氨基酸(赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸、L－氨基酸按0．5%加入，DL－氨基酸按1%加入)，再进行校正pH至6．8，对照培养基不加氨基酸、分装于灭菌的小试管内，每管0．5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

5．蛋白胨水(靛基质试剂)

(1)成分：

蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g 蒸馏水 1000mL

氯化钠 5g (pH7．4)

(2)制法：按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。

(3)靛基质试剂：

柯凡克试剂：将5g对二甲氨基甲醛溶解于75mL戊醇中，缓加浓HCl 125mL。

欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL(95%)乙醇内，然后缓缓加入浓HCl20mL。

6．尿素琼脂(pH7．2)

(1)成分：

蛋白胨 1g 琼脂 20g

氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL

葡萄糖 1g 20%尿素溶液 100mL

磷酸二氢钾 2g (pH7．2±0．1)

0．4%酚红溶液 3mL

(2)制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶，121℃高压灭菌15min，冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2%，最终pH为7．2±0．1，分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

7．氰化钾培养基(KCN)

(1)成分：

蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL

氯化钠 5g 0．5%氰化钾溶液 20mL

磷酸二氢钾 0．225g (pH7．6)

磷酸氢二钠 5．64g

(2)制法：将除氰化钾以外的成分配好后，分装烧瓶，121℃高压灭菌15min，放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0．5%氰化钾溶液2．0mL(最后浓度为1∶1000)，分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存2个月，同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

(3)说明：KCN剧毒，使用时应小心，勿沾污，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行，试验失败主要原因是封口不严，KCN逐渐分解，产生HCN气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生成，因而造成假阳性反应。

8．磷酸盐缓冲溶液

(1)贮藏液成分：

磷酸二氢钾 34g 蒸馏水825mL

1mol／L氢氧化钠溶液 175mL (pH7．2)

(2)制法：先将磷酸盐溶于500mL蒸馏水中，用1mol／L氢氧化钠校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。

(3)稀释液：取贮藏液1．25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。

9．明胶磷酸盐缓冲液

(1)成分：

明胶 2g 蒸馏水 1000mL

磷酸氢二钠 4g (pH6．2)

(2)制法：加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。

10．ONPG培养基

(1)成分：

邻硝基酚β－D－半乳糖苷(ONPG) 60mg 1%蛋白胨水(pH7．5) 30mL

0．01mol／L磷酸钠缓冲液(pH7．5) 10mL

(2)制法：将ONPG溶于缓冲液内加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管中，每管0．5mL，用橡皮塞塞紧。

(3)试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物满环接种，于36℃±1℃培养1～3h观察结果。如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。

(三)一般培养基和专用培养基

1．肉浸液肉汤

(1)成分：

绞碎牛肉 500g 磷酸氢二钾 2g

氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL

蛋白胨 10g

(2)制法：将绞碎、去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面的浮油，隔水煮沸0．5h，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量，加入蛋白胨、氯化钠和磷酸氢二钾，溶解后校正pH为7．4～7．6，煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。

2．血琼脂平板

(1)成分：

pH7．4～7．6豆粉琼脂 100mL 脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL

(2)制法：加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板，亦可分装灭菌试管，置成斜面，亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。

3．营养琼脂

(1)成分：

蛋白胨 10g 琼脂 15～20g

牛肉膏 3g 蒸馏水 1000mL

15%氢氧化钠 2mL

(2)制法：将除琼脂氢氧化钠以外的各成分溶解于蒸馏水中，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH7．2～7．4，加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化，分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

(3)说明：此培养基可供一般细菌培养使用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1．5%；如做成平板或斜面则应为2%。

4．乳糖胆盐发酵管

(1)成分：

蛋白胨 20g 0．04%溴甲酚紫水溶液 25mL

猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 蒸馏水 1000mL

乳糖 10g (pH7．4)

(2)制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。

(3)说明：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。

5．乳糖发酵管

(1)成分：

蛋白胨 20g 蒸馏水 1000mL

乳糖 10g (pH7．4)

0．04%溴甲酚紫水溶液 25mL

(2)制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。

(3)说明：双料乳糖发酵管除蒸馏水外其他成分加倍。

6．EC肉汤

(1)成分：

胰蛋白胨 20g 磷酸二氢钾 1．5g

3号胆盐(或混合胆盐) 1．5g 氯化钠 5g

乳糖 5g 蒸馏水 1000mL

磷酸氢二钾 4g

(2)制法：将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终pH为6．9±0．2。

7．GN增菌液

(1)成分：

胰蛋白胨 20g 磷酸氢二钾 4g

葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 1．5g

甘露醇 2g 氯化钠 5g

柠檬酸钠 5g 蒸馏水 1000mL

去氧胆酸钠 0．5g (pH7．0)

(2)制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH，分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。

8．HE琼脂

(1)成分：

胨 12g 琼脂 18～20g

牛肉膏 3g 蒸馏水 1000mL

乳糖 12g 0．4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL

蔗糖 12g Andrade指示剂 20mL

水杨素 2g 甲液 20mL

胆盐 20g 乙液 20mL

氯化钠 5g (pH7．5)

(2)制法：前面7种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液，将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解，加入甲液和乙液于基础液内，校正pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。

(3)说明：

①此培养基不可高压灭菌

②甲液的配制

硫代硫酸钠 34g 蒸馏水 100mL

柠檬酸铁铵 4g

③乙液的配制

去氧胆酸钠 10g 蒸馏水 100mL

④Andrade指示剂

酸性复红 0．5g 蒸馏水 100mL

1mol／L氢氧化钠溶液 16mL

将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液数小时后，如复红退色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL。

9．SS琼脂

(1)基础培养基成分及制法：

牛肉膏 5g 琼脂 17g

膘胨 5g 蒸馏水 1000mL

三号胆盐 3．5g

将牛肉膏、膘胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中，将琼脂加入600mL蒸馏水中，煮沸使其溶解，再将两液混合，121℃高压灭菌15min，保证备用。

(2)完全培养基成分及制法：

基础培养基 1000mL 10%柠檬酸铁溶液 10mL

乳糖 10g 1%中性红溶液 2．5mL

柠檬酸钠 8．5g 0．1%煌绿溶液 0．33mL

硫代硫酸钠 8．5g

加热溶化培养基，按比例加入上述染料以外的各成分，混合均匀，校正到pH7．0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。

(3)说明：

①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48h使用。

②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。

③可以购SS琼脂的干燥培养基。

10．伊红美蓝琼脂(EMB)

(1)成分：

蛋白胨 10g 2%伊红溶液 20mL

乳糖 10g 0．65%美蓝溶液 10mL

磷酸氢二钾 2g 蒸馏水 1000mL

琼脂 17g (pH7．1)

(2)制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用，临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

11．三糖铁琼脂(TSI)

(1)成分：

蛋白胨 20g 硫酸亚铁铵［Fe(NH₄)₂(SO₄)₂·6H₂O］ 0．2g

牛肉膏 5g 硫代硫酸钠 0．2g

乳糖 10g 琼脂 12g

蔗糖 10g 酚红 0．025g

葡萄糖 1g 蒸馏水 1000mL

氯化钠 5g (pH7．4)

(2)制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热沸腾，以溶化琼脂。加入0．2%酚红水溶液12．5mL，摇匀，分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层，121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

12．半固体琼脂

(1)成分：

蛋白胨 1g 氯化钠 0．5g

牛肉膏 0．3g 琼脂 0．35～0．4g

蒸馏水 100mL (pH7．4)

(2)制法：按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH，分装小试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。

(3)说明：本培养基供动力观察，菌种保存，H抗原位相变异试验等用。

13．葡萄糖半固体发酵管

(1)成分：

蛋白胨 1g 葡萄糖 1g

牛肉膏 0．3g 琼脂 0．3g

氯化钠 0．5g 蒸馏水 100mL

1．6%溴甲酚紫酒精溶液 0．1mL pH 7．4

(2)制法：将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃15min。

14．5%乳糖发酵管

(1)成分：

蛋白胨 0．2g 2%溴麝香草酚蓝水溶液 1．2mL

氯化钠 0．5g 蒸馏水 100mL

乳糖 5g (pH7．4)

(2)制法：除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内，校正pH，将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。

(3)说明：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。

15．胰酪胨大豆肉汤

(1)成分：

胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g 磷酸氢二钾 2．5g

植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g 葡萄糖 2．5g

氯化钠 100g 蒸馏水 1000mL

(2)制法：将上述成分混合，加热并轻轻搅拌、溶解，分装后，121℃高压灭菌15min，最终pH7．3±0．2。

16．Baird－Parker氏培养基

(1)成分：

胰蛋白胨 10g 琼脂 20g

牛肉膏 5g 蒸馏水 950mL

酵母膏 1g 30%卵黄盐水 50mL

丙酮酸钠 10g 1%亚碲酸钾溶液 10mL

甘氨酸 12g (pH7．5)

氯化锂(LiCl·6H2₂O) 5g

(2)制法：增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。

将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷至25℃，校正pH，分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min，临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板，培养基应是致密不透明的，使用前在冰箱贮藏不得超过48h。

17．7．5%氯化钠肉汤

(1)成分：

蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL

牛肉膏 3g (pH7．4)

氯化钠 75g

(2)制法：将上述成分加热溶解，校正pH，分装试管，121℃高压灭菌15min。

18．匹克氏肉汤

(1)成分：

含1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL 1∶800三氮化钠溶液 10mL

1∶25000结晶紫盐水溶液 10mL 脱纤维兔血(或羊血) 10mL

(2)制法：将上述已灭菌的各种成分，用无菌手续依次混合，分装于无菌试管内，每管约2mL，保存于冰箱内备用。

19．3．8%柠檬酸钠溶液

(1)成分：

柠檬酸钠 3．8g 蒸馏水 100mL

(2)制法：取柠檬酸钠3．8g，加蒸馏水到100mL，溶解后过滤，装瓶，121℃高压灭菌15min。

(3)说明：兔(人)血浆制备：取3．8%柠檬酸钠溶液1份加兔(人)全血4份，混好静置，则血球下降，即可得血浆进行试验。

20．庖肉培养基

(1)成分：

牛肉浸液 1000mL 可溶性淀粉 2g

蛋白胨 30g 碎肉渣 适量

酵母膏 5g 还原铁粉(铁屑) 0．1～0．2g

磷酸二氢钠 5g 1mol／L氢氧化钠 25mL

葡萄糖 3g (pH7．8)

(2)制法：称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol／L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清、过滤、加水补足至1000mL，加入除牛肉浸液外的各种成分，校正pH。

牛肉浸液分装15mm×150mm试管2～3cm高，每管加入还原铁粉0．1～0．2g或铁屑少许，将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm，上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0．3～0．4cm，121℃高压灭菌15min。

21．卵黄琼脂培养基

(1)成分：

①基础培养基：

肉浸液 1000mL 琼脂 25～30g

蛋白胨 15g (pH7．5)

氯化钠 5g

②50%葡萄糖水溶液。

③50%卵黄盐水悬液。

(2)制法：制备基础培养基，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min，临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每瓶加入50%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黄盐水悬液10～15mL，摇匀，倾注平板。

22．氯化镁孔雀绿增菌液(MM)

(1)成分：

甲液

胰蛋白胨 5g 磷酸二氢钾 1．6g

氯化钠 8g 蒸馏水 1000mL

乙液

氯化镁(化学纯) 40g 蒸馏水 100mL

丙液

0．4%孔雀绿水溶液

(2)制法：分别按上述成分配好后，121℃高压灭菌15min备用，临用时取甲液90mL，乙液9mL，丙液0．9mL，以无菌操作混合即可。

23．四硫酸钠煌绿增菌液(TTB)

(1)成分：

基础培养基：

多胨或膘胨 5g 蒸馏水 1000mL

胆盐 1g 碘溶液 6g

碳酸钙 10g 碘化钾 5g

硫代硫酸钠 30g 蒸馏水 20mL

(2)制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分瓶每瓶100mL，分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀，121℃高压灭菌15min备用，临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL，0．1%煌绿溶液1mL。

24．亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

(1)成分：

蛋白胨 5g 磷酸氢二钠 5．5g

乳糖 4g L－胱氨酸 0．1g

亚硒酸氢钠 4g 蒸馏水 1008．5mL

磷酸二氢钾 4．5g 1mol／L氢氧化钠 1．5mL

1%L－胱氨酸－氢氧化钠溶液的配法：称取L－胱氨酸0．1g(或DL－胱氨酸0．2g)，加1mol／L氢氧化钠1．5mL，使溶解，再加入蒸馏水8．5mL即成。

(2)制法：将除亚硒酸氢钠和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，待冷备用，另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，待冷，以无菌操作与上液混合，再加入1%L－胱氨酸－氢氧化钠溶液1mL，分装于灭菌瓶中，每瓶100mL，pH应为7．0±0．1。

25．亚硫酸铋琼脂(BS)

(1)成分：

蛋白胨 10g 柠檬酸铋铵 2g

牛肉膏 5g 亚硫酸钠 6g

葡萄糖 5g 琼脂 18～20g

硫酸亚铁 0．3g 蒸馏水 1000mL

磷酸氢二钠 4g (pH7．5)

煌绿 0．025g

(2)制法：将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中，将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解，将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃，将以上液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0．5%煌绿水溶液5mL摇匀，冷至50～55℃，倾注平皿。

(3)说明：此培养基不需高压灭菌，制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用前一天制备，贮藏于室温暗处，超过48h不宜使用。

26．DHL琼脂

(1)成分：

蛋白胨 20g 柠檬酸钠 1g

牛肉膏 3g 柠檬酸铁铵 1g

乳糖 10g 中性红 0．03g

蔗糖 10g 琼脂 18～20g

去氧胆酸钠 1g 蒸馏水 1000mL

硫代硫酸钠 2．3g (pH7．3)

(2)制法：将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中，校正pH，再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，并加入0．5%中性红水溶液6mL，待冷至50～55℃，倾注平板。

27．WS琼脂

(1)成分：

膘胨 12g 琼脂 15g

牛肉膏 3g Andrade指示剂 20mL

氯化钠 5g 0．4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL

乳糖 12g 甲液 20mL

蔗糖 12g 蒸馏水 1000mL

十二烷基硫酸钠 2g (pH7．0)

(2)制法：除指示剂和甲液外，将其他成分加热溶解，不需消毒，校正pH后加入指示剂和甲液，倾注平板应呈草绿色。

(3)说明：本培养基供沙门氏菌分离用，Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。

28．缓冲蛋白胨水(BP)

(1)成分：

蛋白胨 10g 磷酸二氢钾 1．5g

氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL

磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H2₂O) 9g (pH7．2)

(2)制法：按上述成分配好后，以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min，临用时无菌分装每瓶225mL。

本培养基供沙门氏菌前增菌用。

29．麦康凯琼脂

(1)成分：

蛋白胨 17g 蒸馏水 1000mL

膘胨 3g 乳糖 10g

猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 0．01%结晶紫水溶液 10mL

氯化钠 5g 0．5%中性红水溶液 5mL

琼脂 17g

(2)制法：将蛋白胨、膘胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7．2，将琼脂加入600mL蒸馏水中，加热溶解，将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。

临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。

(3)说明：结晶紫和中性红配好后须经高压灭菌。

30．高盐察氏培养基

(1)成分：

硝酸钠 2g 氯化钠 60g

磷酸二氢钾 2g 蔗糖 30g

硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 0．5g 琼脂 20g

氯化钾 0．5g 蒸馏水 1000mL

硫酸亚铁 0．01g

(2)制法：加热溶解，分装后，115℃高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。

(3)用途：分离霉菌用。

31．马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)

(1)成分：

马铃薯(去皮切块) 300g 琼脂 20g

葡萄糖 20g 蒸馏水 1000mL

(2)制法：将马铃薯去皮切块，1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min。

(3)用途：分离培养霉菌。

32．孟加拉红培养基

(1)成分：

蛋白胨 5g 1／3000孟加拉红溶液 100mL

葡萄糖 10g 蒸馏水 1000mL

磷酸二氢钾 1g 氯霉素 0．1g

硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 0．5g 乙醇 适量

琼脂 20g

(2)制法：上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液，另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。