土壤硝态氮的测定

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1．酚二磺酸法 方法原理：土样用饱和CaSO₄·2H₂O溶液浸提后，取一份浸出液在微碱性条件下蒸发至干，残渣用酚二磺酸试剂处理，此时HNO₃即与试剂生成硝基酚二磺酸。反应物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色盐溶液，可在400～425纳米处(或用蓝色滤光片)比色测定。

仪器：分光光度计；水浴锅；瓷蒸发皿。

试剂：

①CaSO₄·2H₂O(二级，粉状)；

②CaCO₃(二级，粉状)；

③Ca(OH)₂(二级，粉状)；

④MgCO₃(二级，粉状)；

⑤Ag₂SO₄(二级，粉状)；

⑥1∶1的NH₄OH；

⑦酚二磺酸试剂：25克白色苯酚(C₆H₅OH，二级)在500毫升三角瓶中，加入225毫升浓H₂SO₄(二级，比重1．84)，混匀，瓶口松松地加塞，置于沸水浴中加热6小时。试剂冷却后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水。必须贮于密闭玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

⑧10毫克／千克标液：0．7220克干燥的KNO3(二级)溶于水，定容至1升，此为100毫克／千克溶液。将此液稀释10倍即为10毫克／千克标液。

测定步骤：

①称取新鲜土样50．00克，放入500毫升三角瓶中，加0．5克CaSO₄·2H₂O和250毫升水，塞后振荡10分钟。放置几分钟后，将悬液的上清液用干滤纸过滤，澄清液用干燥洁净的瓶收集。

②吸取清液25～50毫升(含微克)于蒸发皿中，加约0．05克CaCO₃，在水浴上蒸干(如有腐殖质颜色，可用水湿润后加10%H₂O₂氧化消除)，达到干燥时不应继续加热。冷却，迅速加入2毫升酚二磺酸试剂，将皿旋转，使试剂接触到所有的蒸干物。

③静止10分钟，使其充分作用后，加水20毫升，用玻棒搅拌直至蒸干物完全溶解。冷却后缓缓加入1∶1NH₄OH，并不断搅拌至溶液呈微碱性(溶液显黄色)，再多加2毫升，以保证NH4OH试剂过量。

④将溶液全部转移入100毫升容量瓶中，加水定容。在分光光度计上用光径1厘米比色槽，在波长420纳米处进行比色。

⑤以空白溶液为参比液，调节仪器零点。

⑥工作曲线的绘制：分别吸取10毫克／千克标液0、1．0、2．0、5．0、10．0、15．0、20．0毫克／千克于蒸发皿中，在水浴上蒸干，与待测液相同步骤进行显色和比色，绘制标准曲线。

结果计算：土壤(毫克／千克)=显色液(毫克／千克)×液土比×浸出液稀释倍数式中：显色液(毫克／千克)——从工作曲线查得显色液的(毫克／千克)数；

液土比——土壤浸提液的液土比为5；

浸出液稀释倍数——100毫升／吸取浸出液毫升数。

注意事项：

①土样经风干或烘干易引起变化，故只能用新鲜土壤测定。如需用干土计算，应同时测定水分。

②如果土壤含Cl^－超过15毫克／千克，浸出液须再用Ag₂SO₄处理，除去Cl^－。

③如浸出液中NO₃^－超过1毫克／千克，可加少许尿素加以破坏，一般每10毫升待测液加入20毫克尿素，放置过夜即可。

④碱化时应用NH₄OH而不用NaOH或KOH。

2．硝酸试粉比色法 方法原理：同组织中硝态氮的硝酸试粉比色法。

试剂：

①1N硫酸钠溶液：称取16．0克分析纯结晶硫酸钠(Na₂SO₄·10H₂O)，溶于蒸馏水中并稀释至100毫升(配制时不能用无水硫酸钠代替，因其不易溶解)。

②硝酸试粉：配法同组织中的硝酸试粉比色法。

③50%醋酸溶液：用冰醋酸加等体积水稀释之。

④标液：同组织中的硝酸试粉比色法。

⑤试管法比色卡：玫瑰红色由浅到深表示为1．0、2．5、5．0、10．0毫克／千克，分别表示极缺、转缺、中等、高量四级。

测定步骤：

①制备待测液：称取相当于2．00克干土的新鲜土样于试管中，加入0．5M的碳酸氢钠(石灰性土)或1N硫酸钠(酸性土)10毫升，加塞后剧烈摇动3分钟，放置澄清或干过滤，清液备用。

②试管比色法：吸取上述清液4滴于内径1厘米的小试管中，加50%醋酸1滴，加硝酸试粉1小匙，摇匀，5分钟后与同样操作的标准系列溶液或试管法比色卡比较，定出显色液浓度，将浓度毫克／千克乘以5，即为土壤含量毫克／千克数。

③点滴法：加一小匙硝酸试粉(约麦粒大小)，放于白瓷板凹穴内，并在其中加4滴待测液和1滴醋酸，5分钟后与同样操作显色的标准系列液或试管法比色卡比较，定出显色浓度，将浓度毫克／千克数乘以5，即为土壤含量毫克／千克数。