(2)甘蓝和土壤中残留量检测方法(方法一)

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中国农业科学院茶叶研究所 刘光明 黄雅俊 罗逢健 王运浩 陈宗懋

样本用甲醇提取，SPE-C₁₈柱层析净化，液相色谱法(UV)测定

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 紫外检测器(UV)

振荡器

旋转蒸发器

2．主要试剂

甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚(60～90℃，重蒸)、盐酸、无水硫酸钠

SPE-C₁₈柱

吡虫啉标准品

3．检测步骤

3．1 提取

准确称取15．0g样本(土壤以干重计算)置于500mL平底三角烧瓶中，加100mL甲醇，振荡1h，经无水硫酸钠脱水过滤。残渣再加入80mL甲醇振荡30min，过滤，合并滤液。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将滤液转入500mL分液漏斗中，加入100mL5%氯化钠溶液和100mL石油醚，振摇洗涤，分出水相。石油醚相用50mL5%氯化钠水溶液反萃取后，弃去石油醚相。将水相合并，加入0．5mL6mol／L盐酸，摇匀，用60mL、30mL、30mL二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水后，用旋转蒸发器(50℃)减压浓缩至干。

3．2．2 柱净化

将SPE-C₁₈柱用10mL甲醇预淋，至干，再用去离子水预淋，至干。将上述浓缩残余物用10mL石油醚／乙酸乙酯(8．5∶1．5，V／V)分3次溶解移入小柱，淋出液弃去。再用石油醚／乙酸乙酯(3∶7，V／V)洗脱，收集10mL洗脱液，浓缩至干，用甲醇定容至10mL，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 270nm

色谱柱 Hypersil ODS5μm，250mm×4mm

柱温 30℃

流动相 乙腈／水(35∶65，V／V)

流速 1mL／min

进样量 20μL

保留时间 5．60min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．5×10^－10g。

最低检测浓度 甘蓝0．005mg／kg，土壤0．003mg／kg。

回收率 甘蓝、土壤中添加吡虫啉0．1～5．0mg／kg时，平均回收率分别为83．3%～91．0%、84．4%～92．4%，见表1-21-3。

相对标准偏差 3．5%～12．6%，见表1-21-3。

表1-21-3 甘蓝和土壤中吡虫啉添加回收率及相对标准偏差实验结果