糙米、稻苗、植株和土壤中残留量检测方法(方法二)

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中国农业大学理学院 韩丽君 钱传范

样本用丙酮／水提取，二氯甲烷萃取，浓缩后，在220～250℃条件下，用吡啶盐酸盐将萃取物中的咪鲜胺及其所有代谢物(BTS44595、BTS44596)全部分解转化为2，4，6-三氯苯酚。然后将分解产物通过酸化、碱化、酸化的萃取净化，气相色谱法(ECD)测定2，4，6-三氯苯酚的含量，并换算成咪鲜胺残留量。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 电子捕获检测器(ECD)

高速组织捣碎机

旋转蒸发器

植物粉碎机

振荡器

沙浴锅(电热套加沙子)

2．主要试剂

丙酮、甲苯、二氯甲烷、石油醚、正己烷(重蒸)、吡啶盐酸盐、蒸馏水、1．0mol／L盐酸、0．1mol／L氢氧化钠溶液、氯化钠、无水硫酸钠

咪鲜胺标准品、2，4，6-三氯苯酚标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 糙米

称取10g糙米粉于250mL三角瓶中，加5mL饱和氯化钠溶液、5mL蒸馏水和2mL1．0mol／L盐酸溶液，摇匀后，加60mL丙酮浸泡过夜。振荡提取，抽滤。

3．1．2 稻苗

称取10g稻苗样本，剪碎成1～2cm的短段，加60mL丙酮、5mL饱和氯化钠溶液、5mL蒸馏水和2mL1．0mol／L盐酸溶液，高速捣碎；再用10mL丙酮冲洗捣碎机，合并匀浆液至250mL三角瓶中，浸泡过夜。振荡1h，抽滤。

3．1．3 土壤

称取10g碾碎过40目筛样本置于250mL三角瓶中，加5mL饱和氯化钠溶液、5mL蒸馏水和2mL1．0mol／L盐酸溶液后，摇匀后，加60mL丙酮浸泡过夜。振荡1h，抽滤。

3．1．4 稻秆

称取5g剪碎的稻秆置于250mL三角瓶中，加5mL饱和氯化钠水溶液、5mL蒸馏水和2mL1．0mol／L盐酸溶液后，摇匀，加60mL丙酮浸泡过夜。振荡提取1h，抽滤。滤渣用30mL丙酮冲洗。

3．2 液-液分配

合并提取液至250mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器(45℃)减压浓缩蒸去丙酮，剩余水相转入250mL分液漏斗中，用10mL二氯甲烷冲洗烧瓶，合并于分液漏斗中。加饱和氯化钠水溶液40mL、蒸馏水60mL，用40mL、20mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥、过滤至100mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器(40℃)减压浓缩至5mL，转入25mL反应瓶中，再浓缩至0．5～1mL，室温下用氮气吹干。

3．3 分解转化

在反应瓶中加入8g吡啶盐酸盐和少量沸石，接冷凝管置沙浴电热套中，在220～250℃反应1h，冷却。用10mL蒸馏水冲洗冷凝管后，塞紧反应瓶瓶盖，用力摇荡使之溶解。用30mL蒸馏水分几次冲洗反应瓶，合并洗液至250mL分液漏斗中，待净化。

3．4 净化

在分液漏斗中加入10滴1mol／L盐酸，分别用石油醚／甲苯(16∶4，V／V)和石油醚／甲苯(18∶2，V／V)萃取。合并有机相后，再用30mL、20mL0．1mol／L氢氧化钠溶液反萃取。水相用5mL1mol／L盐酸酸化后，用15mL、10mL石油醚萃取。合并有机相，经无水硫酸钠干燥过滤至50mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器(50℃)减压浓缩至1～2mL。用正己烷定容至10mL，待测。

3．5 气相色谱法测定

检测器 ECD

色谱柱 HP-35MS，30m×0．25mm×0．25μm

检测温度 进样口250℃；检测器280℃；柱温80℃，20℃／min，160℃，1min，5℃／min，200℃，1min，20℃／min，265℃，5min

载气 高纯氮，3mL／min，分流比30∶1

进样量 1μL

保留时间 9．5min。

4．结果计算公式

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量2，4，6-三氯苯酚1×10^－11g(折合成咪鲜胺2×10^－11g)。

最低检测浓度 糙米、稻苗和土壤0．02mg／kg，稻秆0．04mg／kg。

回收率 糙米、稻苗和土壤中添加咪鲜胺0．1～1．0mg／kg时，平均回收率分别为83．9%～88．0%、85．1%～103．4%和78．5%～96．2%；稻秆中添加咪鲜胺0．2～1．0mg／kg时，平均回收率为72．9%～97．7%。见表2-25-5。

相对标准偏差 1．7%～9．4%，见表2-25-5。

表2-25-5 糙米、稻苗、稻秆和土壤中咪鲜胺添加回收率及相对标准偏差实验结果