高铁血红蛋白还原试验

本试验为检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏所致溶血性贫血的过筛试验。红细胞内的G6PD在磷酸戊糖旁路糖代谢中，能使G6PD变为6-磷酸葡萄糖酸，同时辅酶Ⅱ(NADP)被还原为还原型辅酶Ⅱ(NADPH)；高铁血红蛋白(HbFe⁺⁺⁺)在NADPH供氢的条件下，也还原成亚铁血红蛋白 (HbFe₊₊)。试验时用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe₊₊₊，以美蓝的递氢作用加强磷酸戊糖旁路的糖代谢。如果红细胞内G6PD含量正常，则有足量NADPH产生，可使HbFe⁺⁺⁺很快被还原成红色的HbFe⁺⁺；如红细胞缺乏G6PD，则NADPH生成减少，具有棕褐色的HbFe₊₊₊被还原成HbFe₊₊量也减少。高铁血红蛋白还原试验定性法是以颜色判定： 红色为阴性；暗棕红色为阳性，提示G6PD缺乏为纯合子；棕红色为中间型反应，提示G6PD缺乏为杂合子。如定性试验为阳性，或虽试验为阴性，但临床疑为G6PD缺乏症时，可进行高铁血红蛋白还原试验定量法。本法采用肝素或枸橼酸钠抗凝血1.5～2.0ml加入葡萄糖20mg，离心，调整红细胞比积为35～40%，再摇匀，取此血1.0ml与0.045%美蓝及1.25%亚硝酸钠-葡萄糖液等量混合液0.1ml，混合于试管中，置37℃水浴3h，取出后取其0.1ml加于10ml磷酸盐缓冲液中，在635nm波长下比色，其光密度读数为S_A。另取0. 1ml不加试剂，同样温育的血液与磷酸盐缓冲液混合，测其光密度读数为B，再于此液中加入一滴1.25%亚硝酸钠，测得光密度为S_T。高铁血红蛋白还原百分数=(1-S_A-B/S_T-B)×100。高铁血红蛋白还原百分数在75%以上者为正常。杂合子为74～31%。纯合子在30%以下。