酶抑制法enzymatic inhibition method

利用一些农药对酶的抑制作用进行农药分析的方法。常用的酶类有胆碱酯酶和羧酸酯酶等，检测对象为有机磷和氨基甲酸酯类农药。此法简单、快速、灵敏，应用范围广，可鉴别“有毒”物质，不需贵重仪器设备； 但准确度、精密度不高，选择性差，有时有干扰。此法于1951年由美国吉汪(P.A.Giang)首先用于农药残留分析，检测极限为微克级。1968年加拿大门多扎(C.E.Mendoza)对方法作了较大改进，使检测极限达纳克级。
原理 有机磷或氨基甲酸酯类农药，对动物组织或血液中的胆碱酯酶和羧酸酯酶有强抑制作用，在离体情况下亦能抑制。胆碱酯酶与羧酸酯酶等，同属水解酶类，皆为催化水解反应。胆碱酯酶反应为：

以上两反应中，酶对基质进行水解后生成物的数量与酶的活性有关，而酶的活性又与农药含量有关，故测出生成物的数量即知农药含量。
酶源和基质 常用酶源有动物(牛、猪、鼠、兔、鸡、鸭)肝脏、马血清、人血清、蝇头中的胆碱酯酶；兔、牛、鼠的羧酸酯酶等。酶的基质为氯化、溴化或碘化乙酰胆碱； 乙酸萘酯—固蓝B；乙酸靛酯； 乙酸吲哚酯； 乙酸-5-溴吲哚酯等。
检测方法 利用有机磷和氨基甲酸酯类农药对离体胆碱酯酶和羧酸酯酶的抑制作用，可检测上述种类农药存在与否（不能确定具体农药成分）; 根据测定基质水解后产物的含量与标准品比较，可进行定量分析。主要方法有五种：❶△pH法。测定基质经水解后所产生的乙酸；
❷电位滴定法。把基质经水解所产生的乙酸进行电位滴定；
❸测压法。测乙酸等和碳酸氢钠作用所放出CO₂气体的压力；
❹比色法。测基质水解产物和显色剂反应后的颜色；
❺薄层酶抑制法。利用薄层把农药分离，在板上进行酶抑制反应后显色测定。以上各法的检测极限大都在毫克/千克水平以下，有的可达微克/千克水平。