植物病毒保存preservation of plant virus

对已鉴定或研究过的植物病毒材料需要进行保存，保存的目的是维持病毒的侵染性，保持病毒的性状不发生变异和防止病毒的混杂。保存各种标准植物病毒材料，对病毒的鉴定与分类、遗传变异及侵染与复制等研究都是十分重要的。在保存过程中，病毒的侵染性往往会降低，如有的病毒能耐冰冻但不耐融化；干燥过程中溶质变浓也可引起病毒失活。加入保护剂(如甘油、乳糖、葡萄糖、蛋白胨等)有时能保护叶片或汁液中病毒的活性。有的病毒在寄主植物上长期保存后会丧失由昆虫介体传播的能力，或是发生变异，形成新的突变株系。保存植物病毒的方法有下列几种。
在寄主植物上保存 是经常采用的方法，被保存的病毒不易失活与变异，但易被其他病毒混杂。寄主植物保存病毒还需占用相当的温室面积与相应的隔离设施。选用的寄主植物应能长期存活和保存病毒的种类，以免经常转接；剪去一年生植物的花梗或利用不定芽重新生枝也可延长植株存活的期限，减少转接的次数。在马铃薯、果树及多种花卉等无性繁殖的寄主植物上，病毒可以通过无性繁殖器官直接传递给后代。对某些不能由汁液摩擦接种传播的病毒，如马铃薯卷叶病毒，利用无性繁殖的寄主植物保存是唯一的保存方法。对不引起系统感染的病毒，如烟草坏死病毒还必需定期转接才能保存。
无水氯化钙快速干燥病组织法 是一种常用的简便保存方法。无水氯化钙是一种强力吸湿剂，其用量至少是病叶组织含水量的两倍以上。先将病叶去除大叶脉后剪成细条状或小方块，然后放入底层装有颗粒状或块状无水氯化钙的试管或称量瓶中，并在其上放置双层纱布或滤纸以避免两者直接接触。然后将容器加盖密封，立即放入1～4℃冰箱内保存。这种方法的保存期限随病毒种类或株系以及寄主植物的不同而有所差别，如烟草环斑病毒在普通烟三生品种的干叶中可存活17年以上，而苜蓿花叶病毒爱达荷株系在菜豆上仅能保存一年半左右。
冷冻干燥病株汁液的方法 选择含病毒量高的病叶组织，经研磨后用纱布挤出汁液，并在汁液中溶入α-葡萄糖和蛋白胨，再装入小安瓿瓶中进行真空冷冻干燥。然后立即热封安瓿瓶顶部，贮放在黑暗的室温条件下。病毒在不同寄主植物汁液中冷冻干燥，对保存时期的长短有不同的效果。试验表明白菜、苋色藜、心叶烟、普通烟（白筋烟品种）、菜豆以及克氏烟等是较适宜保存病毒的寄主植物。对67种植物病毒测定的结果表明有些病毒，如苜蓿花叶病毒、花椰菜花叶病毒、黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒、烟草花叶病毒与坏死病毒以及番茄不孕病毒等用此法能保存10年以上。
直接低温冷冻病组织的保存方法 将病组织装入密封的塑料袋中，直接在-20℃下冷冻，可以保存一些植物病毒达数月至数年之久，如果在更低的温度下(-60～-50℃)则能保存更长时间。
此外，液氮也被广泛用于植物病毒的保存，在-196℃超低温下可以长期保持黄瓜花叶病毒、大麦条纹花叶病毒、烟草环斑病毒与条纹病毒以及甘蔗花叶病毒等的侵染性。具体操作方法是将新鲜的或经化学脱水后的病叶放入小试管(亦可加30%甘油)密封后直接放人液氮灌内。植物病毒在不同条件下，其保存效果不同（见表）。

12种植物病毒在不同条件下的保存效果

(根据Hollings,M及R.A.Eelliot,1960及Bos,L,1969等)

病 毒	保存寄主	保存条件			0～4℃干燥
		0℃	-20℃	冷冻干燥
菜豆普通花叶	菜豆	-	+		+
菜豆黄花叶 香石竹斑驳 香石竹环斑	蚕豆 香石竹 豇豆	- +	+ + +	- + +	+
黄瓜花叶 马铃薯卷叶	心叶烟 酸浆、马铃薯	- -	- -	+ -	+
马铃薯X 马铃薯Y	心叶烟、马铃薯 酸浆、马铃薯	+ -	+ +	+ +	+ +或-
烟草花叶	普通烟	+	+	+
烟草坏死 烟草脆裂 番茄斑萎	普通烟 克氏烟 千日红、旱金莲	+ + -	+ + -	+ + -	+

注：+——半年以上有侵染性
-——无侵染性或短期有侵染性