薄层层析法分离脂类

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由于薄层层析法设备简单，且分辨率高，故脂类物质常用此法分离鉴定。

本实验以硅胶G为支持物，脂类的显色剂由过氯酸与磷钼酸等组成。过氯酸使脂类物质中的不饱和键氧化断裂生成醛类物质，而醛类使磷钼酸中的Mo6+还原生成钼蓝而显色。

试剂和仪器

(1)硅胶G(含有煅石膏的硅酸凝胶)；

(2)展层剂：由石油醚(沸点60℃～90℃之间)、丁酮、乙酸三者组成，其体积比为：95∶4∶1；

(3)胆固醇标准液：配成1毫升含1毫克的氯仿溶液；

(4)油酸甘油三酯标准液：配成1毫升含1毫克的氯仿溶液；

(5)卵磷脂标准溶液：配成1毫升含1毫克的氯仿溶液；

(6)油酸标准溶液：配成1毫升含1毫克的氯仿溶液；

(7)显色剂：称磷钼酸5克溶于70毫升水与25毫升95%乙醇中，添加70%过氯酸5毫升，混匀，室温中保存。

(8)试样：猪油、菜油、鸡蛋黄的氯仿提取液；

(9)8×12厘米薄玻璃片；

(10)层析展开用层析缸(也可用标本缸代替)；

(11)研钵；

(12)喷雾器；

(13)烘箱。

操作步骤

(1)层析板的制作。称硅胶G1．5克，置研钵中，加蒸馏水5毫升，研匀后迅速倾倒在干燥清洁的薄玻片上，用涂铺器或玻璃棒将其均匀铺开，水平放置桌上，待其凝固后置105℃烘箱中烘干备用。

(2)用毛细玻管分别吸取各种脂类标准液及试样提取液，在硅胶板的一端距边缘1．5厘米处，取1厘米间距点样。记录各样本在薄板上的排列位置。待溶剂蒸发后，置盛有展开剂的层析缸中，点样一端在下(但样本不能浸在展层剂中)，按上升方向进行展开。

(3)待展开剂上升到距薄板上端1厘米左右时，将薄板取出，使展开剂大部分挥发后，置烘箱中烘干。

(4)显色。喷磷钼酸显色剂，放置片刻可见显出色斑。

(5)色斑显现后，参照标准样本的相对位置及R值，鉴别试样中的脂类。