比色法测定粗纤维

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用2%盐酸除去可溶性糖，淀粉、半纤维素后，再用80%硫酸使纤维素溶解并加热水解为葡萄糖，测定出葡萄糖含量，再换算为纤维素含量。

试剂

(1)2%盐酸溶液：取20毫升比重1．19的浓盐酸加蒸馏水352毫升。

(2)80%硫酸溶液：取80毫升浓硫酸(比重1．84)加到18．1毫升水中。

(3)30%氢氧化钠溶液：称30克氢氧化钠加蒸馏水至100毫升。

(4)蒽酮试剂：称0．4克蒽酮溶于100毫升88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合)，溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。

(5)标准葡萄糖溶液：称250毫克干燥的葡萄糖(分析纯)溶解并定容至250毫升容量瓶中，用移液管取以上溶液10毫升，定容至100毫升容量瓶中。此液含糖为100微克／毫升。

操作步骤

1．样品液的制备：称10克干燥粉碎的样品，置250毫升磨口烧瓶中。加入2%HCl150毫升，回流煮沸3～5小时，用石棉古氏坩埚或烧结玻璃漏斗抽滤。用热水洗涤至无氯离子为止。抽干，再用乙醇和乙醚洗涤一次，除去水分。风干，把坩埚或烧结玻璃漏斗连同沉淀物放入烧杯中，注入10倍量的80%硫酸，搅匀，放置2．5小时，使纤维素溶解。加入15倍酸量的水，置水浴上加热5小时，水解为葡萄糖，冷却，用30%氢氧化钠调pH为中性。然后定容至1000毫升。

2．标准曲线的制备：取5支试管，分别加入标准葡萄糖溶液0，0．4，0．8，1．2，1．6毫升。再用蒸馏水补齐至2毫升。各管分别含葡萄糖量为0，40，80，120，160微克。

各管分别加入蒽酮试剂6毫升，摇匀置沸水浴中加热5分钟，取出流水冷却，以不含葡萄糖的试管液体为空白，在721型分光光度计上以640nm波长测定其光密度，再以光密度为纵坐标，糖含量为横坐标，绘制标准曲线。

3．样品液的测定：因蒽酮法测定范围为5～80微克，所以样品提取液必要时可以稀释。

取2毫升样品液置试管中，再加蒽酮试剂6毫升，混匀，于沸水浴中煮沸5分钟，取出流水冷却，于640nm下测光密度。由标准曲线查出其葡萄糖含量。

4．计算：

式中：A：从标准曲线查得样品液葡萄糖量(微克)；

B：样品稀释倍数(即)；

W：样品重量(克)；

10⁶：换算克为微克。

100：换算为百分含量。

粗纤维(%)=葡萄糖(%)×0．9

式中：0．9为0．9克纤维素可水解得1克葡萄糖。