显微镜检查

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一、麻风杆菌的形态

ML一般为短小直棒状，或稍有弯曲，长约1～8微米，宽约0．3～0．4微米。没有鞭毛、芽胞及荚膜。ML具有抗酸性，即具有抵抗稀酸类脱色作用的性质。抗酸性是分枝杆菌在染色上的一个重要特点。ML革兰氏染色呈阳性。

ML另一个重要特点是形态上的多形性。通常在未经治疗的早期病人或复发的病例中，ML的形态多为完整均匀染色形，另外可见断裂形及颗粒形。在ML数量较多时往往聚簇存在，形成球团样或烟束样，称为菌球或菌束。但在有效治疗后，可见菌体发生形态上的变化，进而变为颗粒形，至最终消失。

ML在临床检查时将其形态主要分为三类，即完整均匀形(S形)、断裂形(F形)及颗粒形(G形)。(图2－1)

图2－1 Ziehl-Neelsen抗酸染色后麻风杆菌的形态

注：■红色

淡红色

□无色

完整均匀形：有以下4个特点：(1)菌体完整；(2)均匀深染；(3)两端半圆，两侧整齐；(4)长度为宽度的4倍以上。

断裂形：菌体着色不均匀，有一至数个淡染或空白区。或菌体完整均匀但长度不足宽度的5倍。还包括那些淡染的或菌体内含有异染颗粒的完整均匀菌及奇形怪状的菌。

颗粒形：系指串珠样、竹节样、哑铃形及颗粒形等形状的ML。

二、细菌指数(BI)

BI也称密度指数，是一种经过一定标准化了的表示涂片中细菌数量的指数。BI对麻风病的分型(PB及MB)、观察疗效等都是很有价值的。LL及BL病人BI较高，BB及BT病人的BI较低。TT病人甚至查不到菌。经有效治疗后，前者BI下降速度较慢，而后者下降速度要快得多。

细菌指数记录法：涂片染色后，自然凉干，镜检。先用低倍或中倍物镜选择涂膜内组织细胞，特别是具有巨噬细胞的部分(应尽量避开有红细胞的部分)，换上油系物镜进行检查。每个视野都要认真计数ML的数量并记录下来，按照Ridley记录标准的要求，观察足够数目的视野。视野要按照曲径移动法移动，避免视野重叠(图2－2)。每个视野内的细菌要作全面计数，不应只计数视野中夹部分的细菌，而忽略周边部分的细菌。细菌计数时遇到菌球或菌束，需按照菌球，菌束的大小估计其菌数。一般大菌球约百条菌左右，中菌球50条菌左右，小菌球20条左右。再小的菌球可直接计数。计数颗粒形菌的数目时，一般可将直线排列的2～5个颗粒作为一条菌计算。每个涂膜应记录所观察的视野数，并记录计数的细菌数，以便求出每个视野的平均细菌数，即涂膜的细菌数，再依涂膜的BI计算病人的BI。

病人BI计算公式：

BI可计算到小数后一位。

图2－2 显微镜检查视野移动路线

Ridley对数分级记录标准(涂膜BI)：(图2－3)。

BI1+ 平均每100个油镜视野1－10条菌

检查100个油镜视野

BI2+ 平均每10个油镜视野1－10条菌

检查100个油镜视野

BI3+ 平均每个油镜视野1－10条菌

检查25个油镜视野

BI4+ 平均每个油镜视野10－100条菌

检查25个油镜视野

BI5+ 平均每个油镜视野100－1000条菌

检查25个油镜视野

BI6+ 平均每个油镜视野1000条以上菌(许多菌球)

检查25个油镜视野

图2－3 皮肤涂片细菌指数Ridley对数分级示意图

0=观察100个油镜视野未查见ML。

1=观察100个油镜视野，查见1－10条菌。

2=观察100个油镜视野，平均每10个视野有1－10条菌。

3=观察25个油镜视野，平均每视野1－10条菌。

4=观察25个油镜视野，平均每视野10－100条菌。

5=观察25个油镜视野，平均每视野100－1000条菌。

6=观察25个油镜视野，平均每视野有1000条或1000条以上的细菌。

三、形态指数(MI)

(一)概况

MI是Z-N法染色涂片最常用的描写菌形变化的指数。有人认为，ML出现变形，即出现菌体不完整或着色不均匀的细菌，表示细菌处于不利状态，丧失了活力或趋于死亡。这种现象在有效治疗后更为明显。这种形态上的变化往往早于BI的变化。

(二)计算方法

涂片的每个涂膜计完BI之后应随即计算MI。计算MI时，只计算单条分散的ML(包括完整均匀染色菌，断裂菌及颗粒菌)的数目及其中包含的完整均匀染色菌的数目，不计算菌球或菌束中的细菌数，涂膜的BI在3+以上时，每个涂膜要计数100条菌以上。如涂膜的BI为2+以下时，可不必计足100条菌。如涂膜内细菌很多时，可在目镜内加一带方孔的纸片，将视野缩小使之易于计数。在计数MI时，如涂片上ML较多，最好计足200条或200条以上ML。如计数的细菌太少，MI则缺乏参考价值。每个涂膜计数完毕后，按公式求出该例MI，计算MI不留小数。

四、注意事项

1．涂片质量要好。质量好的涂膜应不含红细胞，每个视野最好平均含2～3个巨噬细胞。计算MI的涂片不得高压蒸汽灭菌，以免ML的受染性发生改变，如单纯计算BI，高压蒸汽灭菌影响不大。

2．染色质量要高。石碳酸复红染色时间要充分，脱色不要过度；涂片制好后要尽快染色，染色后要尽快镜检，不宜拖延过久。

3．显微镜的分辩力要好，尤其油系物镜的分辩率一定要高，并要具有良好的光源；如能使用Kohler照明系统镜检效果则更佳。要熟练掌握显微镜的使用技术，要加强对显微镜的保护，保证显微镜经常处于良好的工作状态。

4．滴加香柏油时，勿使玻棒接触涂膜，以免涂膜上的ML污染香柏油，防止以后造成假阳性。

5．每例细菌阳性的涂片镜检完毕，要用试镜纸仔细擦拭油镜头，以除去镜头上可能粘附的MI，以免将细菌传递给下一张涂片。

6．BI及MI记录标准在执行中要前后一致。同室人员要保持同一标准，并认真执行。

7．临床上怀疑的初诊病人，查菌要特别谨慎。镜下如查见形态不典型的AFB(尤其是鼻粘膜的涂膜)，不能确定是否为ML时，不要轻易下找到ML的结论，应请有经验者审查，或重新涂片镜检。

8．镜检者对ML的各种形态应全面地掌握，尤其对完整均匀形ML更要认真识别。涂片中有些物质，如复红残余颗粒、破碎红细胞的边沿及玻璃划痕等有时颇似ML，要注意鉴别。

9．镜检结果要正确填入检验单，应记录每个查菌部位的BI(或MI)，同时要详细登记于查菌记录簿。

10．染片镜检完毕，需要保留备查的染片应置于标本盒内暗处存放，保存期为3个月，不需保存的染片宜投入2～3%来苏水内浸泡24小时以上，再行清洁处理。