(3)烟叶和土壤中残留量检测方法

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中国农业科学院烟草研究所 曹爱华 徐光军 冯涛 刘保安

样本中的丙硫克百威、克百威用丙酮提取；3-羟基克百威用稀盐酸提取，二氯甲烷液-液分配。混合柱层析净化，气相色谱法(NPD)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

超声波提取器

真空旋转蒸发器

恒温水浴锅(±2℃)

层析柱Φ15mm×300mm

2．主要试剂

丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、异丙醇、盐酸、磷酸、氯化钠、无水硫酸钠、硝酸银、十二烷基硫酸钠

弗罗里硅土 80～100目，600℃处理4h，5%水减活

Darco活性炭 G-60，130℃处理5h

丙硫克百威标准品、克百威标准品、3-羟基克百威标准品

3．检测步骤

3．1 丙硫克百威、克百威

3．1．1 提取

3．1．1．1 烟叶

将10g磨碎的干烟叶样本(20g切碎的鲜烟叶)置于250mL具塞三角瓶中，加入10mL0．1mol／L硝酸银溶液和100mL丙酮，浸泡过夜。超声波提取30min，过滤。取55mL滤液(相当于1／2的样本量)，浓缩至10mL。

3．1．1．2 土壤

称取50g样本，置于250mL具塞三角瓶中，加入10mL磷酸缓冲液(pH8)、140mL丙酮／水(7∶3，V／V)溶液和2g助滤剂545，浸泡过夜。超声波提取30min，过滤，取75mL滤液，浓缩至10mL。

3．1．2 净化

3．1．2．1 液-液分配

将浓缩液转入250mL分液漏斗中，加入50mL饱和氯化钠溶液，用50mL、25mL、25mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水，浓缩至约3mL。

3．1．2．2 柱层析净化

在层析柱内依次填入3cm无水硫酸钠、6g弗罗里硅土与0．25g活性炭的混合填料(土壤样本不加活性炭)、3cm无水硫酸钠。用20mL石油醚预淋。将萃取浓缩液转入柱中，用80mL乙酸乙酯／石油醚／异丙醇(40∶60∶1，V／V／V)洗脱。收集洗脱液，浓缩至1mL，用丙酮定容，待测。

3．2 3-羟基克百威

3．2．1 提取

称取10g干烟叶(鲜烟叶20g，土壤50g)，加入150mL0．25mol／L盐酸，浸泡过夜。超声波提取30min，过滤。

3．2．2 净化

3．2．2．1 液-液分配

取75mL滤液于250mL分液漏斗中，加入15g氯化钠，10mL4%十二烷基硫酸钠，用80mL、50mL、50mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水，浓缩至约3mL。

3．2．2．2 柱层析净化

同3．1．2．2洗脱液浓缩至近干，用丙酮定容，待测。

3．3 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 OV-101，30m×0．53mm

检测温度 柱温240℃；进样口270℃；检测器270℃(丙硫克百威)

柱温185℃；进样口250℃；检测器250℃(克百威)

柱温185℃；进样口250℃；检测器250℃(3-羟基克百威)

载气 高纯氮，0．19MPa

燃烧气 氢气0．017MPa，空气，0．032MPa

进样量 1μL

保留时间 丙硫克百威3．21min，克百威1．48min，3-羟基克百威2．52min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 丙硫克百威为5×10^－11g，克百威为3×10^－11g，3-羟基克百威为5×10^－11g。

最低检测浓度 丙硫克百威：烟叶0．003mg／kg，土壤0．002mg／kg。

克百威：烟叶0．001mg／kg，土壤0．001mg／kg。

3-羟基克百威：烟叶0．003mg／kg，土壤0．002mg／kg。

回收率 干烟叶、鲜烟叶、土壤中添加丙硫克百威、克百威、3-羟基克百威0．05～1．0mg／kg时，平均回收率为丙硫克百威90．7%～98．8%、克百威91．9%～99．2%和3-羟基克百威89．2%～96．2%。见表1-5-4。

相对标准偏差 1．1%～6．8%，见表1-5-4。

表1-5-4 干烟叶、鲜烟叶和土壤中丙硫克百威、克百威、3-羟基克百威添加回收率及相对标准偏差实验结果