(1)甘蓝和土壤中残留量检测方法

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中国农业科学院植物保护研究所 郑永权 董丰收 姚建仁

样本用甲醇和氢氧化钠等混合溶剂提取，SPE-Si柱净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 可变波长紫外检测器(UV)

回旋式振荡器

超声波清洗器

高速分散机

旋转蒸发器

恒温水浴锅(士2℃)

2．主要试剂

甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、丙酮、石油醚(60～90℃)、甲醇、正己烷、浓盐酸、氢氧化钠、乙酸铵、氯化钠、无水硫酸钠

提取液A 甲醇／5%氯化钠／1mol／L氢氧化钠(65∶27∶8，V／V／V)

SPE-Si柱 5mL／500mg

多杀菌素及其主要代谢物标准品：

Spinosad(DE－105) 75．5%FactorA+14．4%Factor D

DE－105Factor K99%

DE－105Factor B94%

DE-105Factor B of Factor D97．4%

3．检测步骤

3．1 提取

称取20g土壤(甘蓝10g)于250mL具塞三角瓶中，加60mL提取液A，超声波提取5min，振荡提取30min，过滤。滤渣用60mL提取液A再振荡提取30min。合并滤液于250mL量筒中，用提取液A定容至140mL。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

取70mL提取液于分液漏斗中，加70mL酸性盐溶液(0．16mol／L盐酸+5%氯化钠溶液)，调节pH至2，用50mL石油醚洗涤，弃去石油醚相。水相中加入10mL1mol／L氢氧化钠使pH至10～12(必须大于9)，用50mL×3石油醚萃取。石油醚相经无水硫酸钠脱水并用15mL石油醚冲洗无水硫酸钠。合并石油醚相，用旋转蒸发器(45℃)浓缩至干，必要时用氮气吹干。用10mL正己烷溶解残留物，待柱净化。

3．2．2 柱净化

将SPE-Si柱依次用10mL二氯甲烷／甲醇(75∶25，V／V)、10mL乙腈、10mL二氯甲烷及20mL正己烷预淋。加入待净化溶液，用正己烷洗涤烧瓶并用于淋洗Si柱，弃去。再依次用5mL×2二氯甲烷和4mL×2乙腈淋洗并弃去。最后用8mL二氯甲烷／甲醇(75∶25，V／V)洗脱并收集，用旋转蒸发器浓缩(45℃)至干，必要时用氮气吹干。加入1mL甲醇／乙腈／2%乙酸铵(1∶1∶1，V／V／V)充分溶解残留物，待测定。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 250nm

色谱柱 ODS Hypersil，150mm×4．6mm，5μm

流动相 甲醇／乙腈／2%乙酸铵(44∶45∶11，V／V／V)

流速 0．8mL／min

进样量 100μL

保留时间 DE-105A 8．81min，DE-105D10．40min，DE-105K5．83min，DE105B7．03min，DE-105B of D8．17min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 DE-105A为2×10^－9g，其余各组分为4×10^－9g。

最低检测浓度 土壤中DE-105A0．005mg／kg，其余各组分0．01mg／kg；甘蓝中DE-105A0．01mg／kg，其余各组分0．02mg／kg。

回收率 土壤中添加多杀菌素0．05～0．50mg／kg时，平均回收率为76．8%～85．6%；甘蓝中添加多杀菌素0．10～5．00mg／kg时，平均回收率为74．9%～93．3%。见表1-31-1、1-31-2。

相对标准偏差 0．7%～6．7%，见表1-31-1、1-31-2。

表1-31-1 土壤中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果