(1)大豆和土壤中残留量检测方法

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中国农业科学院植物保护研究所 郑永权 董丰收 姚建仁

样本用丙酮或甲醇提取，石油醚液-液分配，弗罗里硅土和中性氧化铝柱层析净化，气相色谱法(ECI))测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 电子捕获检测器(ECD)

回旋式振荡器

超声波清洗器

高速分散机

真空旋转蒸发器

层析柱 (A)10mm×200mm，(B)15mm×300mm

2．主要试剂

石油醚(60～90℃，重蒸)、丙酮(重蒸)、甲醇(重蒸)、乙酸乙酯(重蒸)、无水硫酸钠、弗罗里硅土

中性氧化铝 130℃烘烤4h

活性炭 颗粒剂，酸洗

异丙草胺标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤

称取50g样本于具塞三角瓶中，加5mL1%氯化铵水溶液，拌匀。再加入70mL甲醇静置过夜，振荡提取2h，抽滤。滤渣再用30mL甲醇洗涤3次，合并滤液。

3．1．2 豆粉

称取20g粉碎的豆粉于具塞三角瓶中，加70mL丙酮／水(4∶1，V／V)，静置过夜，振荡提取2h，抽滤。滤渣用30mL丙酮／水(4∶1，V／V)洗涤，合并滤液。

3．1．3 青豆

称取20g青豆于高速组织捣碎机中，加入50mL丙酮／水(4∶1，V／V)，匀浆2min，抽滤。滤渣用50mL丙酮／水(4∶1，V／V)洗涤，合并滤液。

3．1．4 大豆植株

称取10g粉碎样本于具塞三角瓶中，加70mL丙酮／水(4∶1，V／V)静置过夜，振荡提取2h，抽滤。滤渣用30mL提取剂洗涤，合并滤液。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将合并后的滤液转入500mL分液漏斗中，加入200mL2%硫酸钠溶液和100mL、50mL石油醚，剧烈振荡萃取两次。分出石油醚相，用10mL石油醚洗涤分液漏斗。合并石油醚相，经过无水硫酸钠脱水后收集于平底烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩(40℃)至2mL。

3．2．2 柱层析净化

3．2．2．1 青豆和土壤

在A层析柱内，依次加入2cm无水硫酸钠、10g中性氧化铝和4cm无水硫酸钠，用10mL石油醚预淋。将青豆(土壤)的浓缩液转入柱内，用20mL石油醚／乙酸乙酯(95∶5，V／V)淋洗，弃去。用70mL石油醚／乙酸乙酯(2∶1，V／V)洗脱并收集，用旋转蒸发器(40℃)浓缩至1mL，定容至5mL，待测。

3．2．2．2 豆粉和植株

在B层析柱内，依次加入2cm无水硫酸钠、15g弗罗里硅土、1g活性炭和4cm无水硫酸钠，用10mL石油醚预淋。将大豆(植株)的浓缩液转入柱内，用20mL石油醚／乙酸乙酯(95∶5，V／V)淋洗，弃去。用70mL石油醚／乙酸乙酯(2∶1，V／V)洗脱并收集，用旋转蒸发器(40℃)浓缩至1mL，定容至5mL，待测。

3．3 气相色谱法测定

检测器 ECD

色谱柱 2mmi．d．×2m玻璃柱，3%SE-30／Chromosorb W(AW-DMCS)，80～100目

检测温度 柱温170℃；进样口250℃；检测器300℃

载气 高纯氮，30mL／min

进样量 1μL

保留时间 8．55min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1×10^－11g。

最低检测浓度 青豆、黄豆0．0025mg／kg，植株0．005mg／kg，土壤0．001mg／kg。

回收率 土壤、青豆、大豆及植株中添加异丙草胺0．01～0．50mg／kg时，平均回收率分别为90．9%～94．3%、95．9%～100．0%、88．0%～95．7%和89．3%～106．0%。见表3-30-1。

相对标准偏差 1．2%～11．6%，见表3-30-1。

表3-30-1 土壤、青豆、豆粉和植株中异丙草胺添加回收率及相对标准偏差实验结果