花生仁、壳、植株和土壤中残留量检测方法

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山东省农业科学院植物保护研究所 于建垒 宋国春

样本用二氯甲烷或甲醇提取，SPE-C₁₈柱净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转蒸发器

超声波清洗器

小型真空泵

2．主要试剂

甲醇(色谱纯)、二氯甲烷、无水硫酸钠、磷酸、重蒸馏水

SPE-C₁₈柱 500mg／5mL

甲咪唑烟酸标准品、代谢产物CL263284标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤

称取10g土壤于250mL具塞三角瓶中，加20g无水硫酸钠、10滴磷酸，用50mL×2二氯甲烷，超声波提取两次，每次10min。滤渣用30mL二氯甲烷分3次冲洗。合并滤液，经无水硫酸钠过滤于250mL圆底烧瓶内，用旋转蒸发器(42℃)浓缩至干，用2mL甲醇／水(1∶1，V／V)浸泡浓缩干的圆底烧瓶2h。

3．1．2 花生壳、植株

称取10g经组织捣碎的花生植株于250mL具塞三角瓶中，加20g无水硫酸钠、10滴磷酸，用80mL、60mL二氯甲烷超声波提取两次，每次10min。滤渣用40mL二氯甲烷分3次冲洗。合并滤液，经无水硫酸钠过滤于250mL圆底烧瓶内，用旋转蒸发器(42℃)浓缩至干，用2mL甲醇／水(1∶1，V／V)浸泡浓缩干的圆底烧瓶2h。

3．1．3 花生仁

称取10g经组织捣碎的花生仁于250mL三角瓶中，加20g无水硫酸钠和10滴磷酸，用100mL×2甲醇，超声波提取两次，每次10min。滤渣用60mL甲醇分3次冲洗。合并滤液，经无水硫酸钠过滤于250mL圆底烧瓶内，用旋转蒸发器(65℃)浓缩至干，用2mL甲醇／水(1∶1，V／V)浸泡浓缩干的圆底烧瓶2h。

3．2 净化

将C₁₈柱用15mL蒸馏水活化。将上述浸泡液转移至柱内，用2～3mL甲醇／水(1∶1，V／V)冲洗圆底烧瓶，并转移至柱内。用带孔橡皮球吹气的方法使溶液较快地通过柱子，收集于10mL容量瓶中。再用2～3mL甲醇／水(1∶1，V／V)淋洗C₁₈柱，同上操作至10mL容量瓶中。用甲醇／水(1∶1，V／V)定容至10mL，经0．45μm的微孔滤膜过滤，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 268nm

色谱柱 ZORBAX SB-C₁₈，4．6mmi．d．×25cm不锈钢柱

柱温 室温

进样量 20μL

流动相❶ (用于花生壳、植株和土壤测定) 甲醇／水(35∶65，V／V)，其中水相用磷酸调pH3～4

流动相❷ (用于花生仁测定) 甲醇／水(32∶68，V／V)

流速1mL／min

保留时间 流动相❶ 甲咪唑烟酸14．2～14．9min，代谢产物6．8～7．1min

流动相❷ 甲咪唑烟酸17．3min，代谢产物7．9min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1×10^－9g。

最低检测浓度 花生仁为0．1mg／kg、花生壳、植株和土壤为0．05mg／kg。

回收率 花生仁、壳、植株和土壤中添加甲咪唑烟酸0．1～10．0mg／kg时，平均回收率为82．7%～105．9%，见表3-21-1；添加甲咪唑烟酸代谢产物0．1～10．0mg／kg时，平均回收率为80．9%～96．7%。见表3-21-2。

相对标准偏差 1．3%～6．3%，见表3-21-1、表3-21-2。

表3-21-1 花生植株、壳、仁、土壤中甲咪唑烟酸添加回收率及相对标准偏差实验结果