棉籽、植株和土壤中残留量检测方法

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浙江省农业科学院农产品质量标准研究所 吴珉 胡秀卿 李振 李康

样本用甲醇提取，弗罗里硅土／中性氧化铝柱层析净化，液相色谱法(DAD)测定

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 二极管阵列检测器(DAD)

台式恒温振荡器

旋转蒸发器

数显恒温水浴锅

循环水真空泵

2．主要试剂

甲醇(色谱纯)、石油醚(重蒸)、甲醇(重蒸)、乙醚(重蒸)、丙酮(重蒸)、浓硫酸、无水硫酸钠、氯化钠

弗罗里硅土 130℃烘烤4h，加5%水(W／W)减活

中性氧化铝 130℃烘烤4h，加5%水(W／W)减活

过50μm滤膜的亚沸重蒸水。

氟咯菌腈标准品

3．检测步骤

3．1 提取

称取10．0g粉碎的棉籽样本(棉叶20．0g，过20目筛的土壤20．0g)，置于250mL三角瓶中，加入50mL甲醇振荡1h。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将提取液滤入500mL分液漏斗中，加入150mL5%氯化钠溶液，用100mL石油醚／乙醚(2∶3，WV)分两次萃取。合并有机相，经无水硫酸钠层滤入250mL圆底烧瓶中，减压浓缩至干。

3．2．2 柱层析净化

3．2．2．1 棉叶

在层析柱中依次加入1cm无水硫酸钠、5g弗罗里硅土和4．5g中性氧化铝和1cm无水硫酸钠，用20mL石油醚预淋。用10mL石油醚溶解圆底烧瓶中的残留物，吸取4mL转入层析柱中，用石油醚／丙酮(9∶1，V／V)淋洗。弃去前50mL，收集后80mL洗脱液于250mL圆底烧瓶中，浓缩近干，用甲醇定容至5mL，待测。

3．2．2．2 棉籽

层析柱净化同棉叶。柱填充物用4．5g弗罗里硅土和5g中性氧化铝。淋洗时弃去前40mL，收集后80mL洗脱液，浓缩、定容，待测。

3．2．2．3 土壤

层析柱净化流程同棉叶。柱填充物用3g弗罗里硅土。淋洗时弃去前10mL，收集后60mL洗脱液，浓缩、定容，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 DAD

波长 268nm，参比360nm

色谱柱 ODSHypersil柱(带预柱)，25cm×4．0mm×5μm

流动相 甲醇／水(7∶3，V／V)

流速 0．5mL／min

柱温 40℃

进样量 20μL

保留时间 8．68min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 6×10^－10g。

最低检测浓度 棉籽、棉叶0．03mg／kg，土壤0．02mg／kg。

回收率 棉叶中添加氟咯菌腈0．10～5．00mg／kg时，平均回收率为83．3%～88．7%，棉籽、土壤中添加氟咯菌腈0．05～5．00mg／kg时，平均回收率分别为80．9%～85．3%和85．7%～90．7%，见表2-11-1。

相对标准偏差 0．6%～5．2%，见表2-11-1。

表2-11-1 棉叶、棉籽和土壤中氟咯菌腈添加回收率及相对标准偏差实验结果

6．棉籽、植株和土壤中氟咯菌腈液相色谱测定谱图

见图2-11-1。