小麦籽粒、植株和土壤中残留量检测方法

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上海市农业科学院植保所 王伟民 盛亚红

样本用乙腈盐酸溶液提取，SPE柱净化，气相色谱法(NPD)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

高速组织捣碎机

旋转蒸发器

国际型振荡器

超声波清洗器

电热恒温水浴锅

固相萃取装置

真空泵

2．主要试剂

乙腈(光谱纯)、正己烷(重蒸)、乙酸乙酯(重蒸)、丙酮(重蒸)、甲苯(重蒸)、甲醇(重蒸)、盐酸、磷酸、氯化钠、无水硫酸钠

10%三甲基硅烷基重氮甲烷正己烷溶液

SPE-SCX柱 Bond Elut LRC SCX，500mg

SPE-C₁₈柱 Bond Elut LRC C₁₈，500mg

SPE-Si柱 Bond Elut LRC Si，500mg

吡草醚标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 小麦籽粒(麦粉)、土壤

称取20g样本，放入500mL三角烧瓶中。加入100mL乙腈／1mol／L盐酸(4∶1，V／V)溶液，振荡提取1h，抽滤。滤渣用100mL提取液洗涤两次，合并滤液。

3．1．2 植株

称取20g样本，加入120mL乙腈／1mol／L盐酸(4∶1，V／V)溶液，高速匀浆2min，抽滤。滤渣用100mL上述提取剂洗涤，合并滤液。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将上述滤液用旋转蒸发器(40℃)浓缩后，加入20mI饱和氯化钠溶液，转入250mL分液漏斗中，用40mL、30mL、30mL正己烷／乙酸乙酯(9∶1，V／V)萃取。萃取液经装有10g无水硫酸钠的漏斗脱水，再用10mL正己烷／乙酸乙酯(9∶1，V／V)洗漏斗。合并萃取液与洗涤液，用旋转蒸发器(40℃)浓缩至近干，氮气吹干。

3．2．2 离子交换柱净化

加入1mL丙酮溶解残余物，移入SPE-SCX柱中，用4mL丙酮分3次洗烧瓶并用于上柱洗脱。收集洗脱液于具塞刻度试管中，定容至10mL。

将定容后的溶液分成A、B两份样品，每份5mL，分别在40℃条件下用氮气吹干。A份样品用于测定吡草醚母体，B份样品用于测定吡草醚的降解产物E1。

3．2．3 甲基化反应

取样品B，加入0．4mL甲苯、0．1mL甲醇和0．1mL10%三甲基硅烷基重氮甲烷正己烷溶液，在室温下反应0．5h，反应完毕后在40℃条件下用氮气吹干。

3．2．4 C₁₈柱与Si柱净化

3．2．4．1 样品A

在样品A中加入1mL乙腈／磷酸缓冲液(4∶6，V／V)，过SPE-C₁₈柱，然后用4mL上述溶液分4次洗涤，弃去。用4mL乙腈洗脱，洗脱液在40℃条件下用氮气吹干。残余物用0．5mL正己烷／丙酮(9∶1，V／V)溶液溶解后，加到SPE-Si柱上，再用0．5mL上述溶液洗涤。最后用5mL正己烷／丙酮(8∶2，V／V)溶液洗脱。洗脱液在40℃下用氮气吹干。准确加入1mL甲苯，超声波助溶，测定吡草醚母体。

3．2．4．2 甲基化的样品B

净化方法同样品A。用1mL甲苯溶解后，测定吡草醚的降解产物E1。

3．3 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 BP-608，30m×0．53mm×0．5μm

检测温度 进样口230℃；检测器300℃；柱温150℃，20℃／min，230℃，10min

载气 氦气，6mL／min

燃烧气 氢气2．3mL／min，空气60mL／min

进样量 2μL

保留时间 10．45min(吡草醚)，11．20min(代谢物E1)

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 2×10^－11g(吡草醚)，1×10^－10g(E1)。

最低检测浓度 0．001mg／kg(吡草醚)，0．005mg／kg(E1)。

回收率 小麦籽粒、麦秆和土壤中添加吡草醚0．05～1．00mg／kg时，平均回收率分别为88．0%～102．0%、91．0%～108．0%和89．0%～104．0%。见表3-31-1。

相对标准偏差 2．2%～19．2%，见表3-31-1。

表3-31-1 小麦籽粒、麦秆和土壤中吡草醚添加回收率及相对标准偏差实验结果