菌种保藏culture collection

保持微生物种的存活性，维持其遗传性状的技术。保藏的对象包括各类微生物、病毒和噬菌体，人类和动物的细胞系、杂交瘤、体外质粒，植物组织培养，以及发展中的基因文库，故现通称为培养物保藏。
微生物菌种是国家的生物资源，菌种的妥善保藏对微生物的研究和利用是不可缺少的环节。很多国家相继设立了国家级的微生物菌种保藏机构。因菌种保藏结果评价的实验周期很长，从业人员又较少，同行间交流显得特别重要。国际生物学界有鉴于此，成立了专门的国际性学术组织——世界培养物保藏联盟(World Federation for Culture Collection 简称WFCC)，沟通各国同行的联系，并组织四年一届的国际会议，交流经验，推动培养物保藏业务的发展。
要求 ❶在保藏期间保持菌种存活，在取用时，可令其迅速恢复生长；
❷在保藏期间不发生混杂、污染，保持纯种状态，并谨防其他意外，如名称、冠缀、株号误写等；
❸保藏期间应尽可能使菌种保持入藏时原有的特性，即维持菌种遗传性状的稳定性，不发生或少发生变异，对于生产菌株要求不发生或少发生经济性状的变异，如苏云金芽孢杆菌应保持入藏前的杀虫效能等。为达到上述目的，必需将菌种的代谢速率降低至最低度或处于停滞状态，而又能维持其存活性，主要是使菌种处于低温、绝氧或干燥的状态，或兼有上述二种或三种状态。
方法 取决于培养物的特性、保藏期限、任务和保藏者所具有的条件。
传代培养保藏法 是最基本的保藏法。用斜面、穿刺或其他适当方法培养传代菌种，一般需将培养物保藏于5℃左右的冰箱中，保藏的适宜温度还因微生物的种类而异。本法适用于生产中频繁取用的种子菌或不适于其他方法保存的特殊菌种。亦有些专业保藏单位对重要的菌种采用多种方法保藏同一菌株，其中包括传代保藏。传代培养保藏法的优点是所需要条件简单，但缺点较多：❶由于反复传代，菌株易发生变异；
❷由于培养基成分或培养条件的变化，可能使菌种繁殖不良，甚至有丧失菌种的危险；
❸工作量大，存放菌种占用的空间多；
❹许多菌种同时多次传代保藏易造成污染、混杂、名称或株号的误写等。
液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养保藏法的一种改进，这是利用在斜面上加注灭菌的液体石蜡使培养物隔绝空气，同时防止培养基干涸而达到延长保藏时间的目的。本法适用于霉菌、酵母菌、放线菌和好气细菌的保藏。保藏时间长短因菌种类型而异，有的菌种可用此法保藏10年甚至更长的时间。这一方法的优点是简单易行不需特殊装置，特别适用于那些采用冻干保藏存活困难的某些菌种。缺点是不适于许多菌种；用过的液体石蜡管清洗麻烦； 接种环自石蜡管挑取过培养物后在火焰上烧灼时会连同残留液体石蜡一起飞溅。
载体保藏法 将菌体吸附于适当载体 (土壤、细砂、硅胶、瓷珠、纸片等)上，然后减压干燥保藏。
冷冻干燥保藏法 可用于大多数细菌和放线菌、酵母菌和产孢子的霉菌以及某些丝状真菌，也适用于保藏病毒、噬菌体、体外质粒和其他DNA分子。本法在操作上分几个步骤。❶将保藏的菌种接入保护剂制成菌悬液；
❷把混有保护剂的菌悬液分装于灭过菌的安瓿管经-30℃以下预冻处理，可直接置入低温冰箱，也可用干冰（固体二氧化碳）加乙醇预冷；
❸在冷冻干燥机或自行装配的冷冻干燥装置中进行冷冻干燥，升华排除水分，干燥终点可根据经验观察冻干材料的颜色和结块的形状加以判断，或在一批冻干材料中加入一管盛有氯化钴试纸(浸入3%氯化钴溶液，取出后干燥)，以试纸变蓝为准；
❹真空熔封，如果进行冻干的安瓿管安装在冻干机相联的多歧管乳头上，则可直接进行真空熔封，如果冻干是在箱内或小室中完成，则需在停机后取出安瓿管再在真空下熔封，转移安瓿管时注意防止冻干结块材料反潮和空气进入安瓿管，故待熔封的冻干管较多时，宜先将其置入盛有干燥剂的干燥器中，再分批插入多歧管进行真空熔封，熔封前用高频火花真空检测器检查真空度，以蓝紫色辉光为合格。熟练操作取得经验后不必逐管检测，以免放电对冻干培养物的影响。
液氮保藏法 本法适用范围最广，适于绝大多数微生物、病毒、噬菌体、人类和动植物组织、原代及传代细胞、杂交瘤、体外质粒、重组DNA、单细胞藻株、原生动物等。其中某些培养物甚至唯有液氮保藏才能保持存活。一般是将菌种或其他保存材料用保护剂制成悬液，分装于安瓿管中熔封，或分装于特制的密封螺旋盖玻瓶或塑料小管中，在4℃下把密封或熔封的小管浸入适当色素液中，如有色素浸入，表示管壁有裂纹，则应废弃，以防止偶尔发生的由于管破损溢入液氮，取管时液氮在常温下汽化，迅速膨胀而使小管爆破伤人。分装好的保藏物置入-20～-30℃的冰箱中预冻30分钟到1小时，有条件的单位可再转入-70℃冰箱中预冻1～2小时或过夜，还可在自控降温仪中以每分钟降低1℃左右的缓慢速率冷却到-25℃或更低的温度，然后转入液氮罐中作长期保存。采用本法时一定要保证液氮的供应，定期检查保藏容器中的液氮残留量及时添补。

菌种保藏culture preservation,culture collection

保持微生物菌株的生活力和遗传性状的技术。目的在于把从自然界分离到的野生型，或经人工选育得到的变异型纯种，使其存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异，保持菌种原有的各种特征和生理活性。基本原理是使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，也就是使微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。干燥、低温和隔绝空气是保证获得这种状态的主要措施。有针对性地创造干燥、低温和隔绝空气的外界条件，就是微生物菌种保藏的基本技术。常用的方法有冻干保藏法、深低温保藏法、液氮保藏法、矿油封藏法、固体曲保藏法、砂土管保藏法、琼脂穿刺保藏法等。日常工作中，常选用4℃冰箱进行短时间的菌种保藏。

菌种保藏

为使菌种达到不死、不衰、不杂和便于交换使用的目的而采取的各种保藏方法。如低温保藏法、干燥保藏法、隔绝空气保藏法、冻干保藏法和活体保藏法等。原理大同小异，首先挑选优良纯种（最好采用它们的休眠体），并创选一个有利于菌种休眠的环境条件，如干燥、低温、缺氧、缺乏营养、添加保护剂等。