病毒基因图

基因图是以图的形式表达基因组的组织结构与功能，或更具体地说，表达了基因 （核酸） ——产物 （蛋白质）——功能——性状之间的关系，以及基因间的相互关系，因而具有重大的理论意义。
理论上有三种构造基因图的方法： 遗传学方法，生物化学方法，遗传与生物化学相结合的方法，但实际上多用后法。
应用遗传学方法构造基因图，原则上可分为六个步骤：
❶分离纯系野生型病毒，通常用蚀斑连续纯化三代；
❷在诱变剂作用下选育突变株，主要用温度敏感突变株，有时辅以宿主范围突变株或抗药株；
❸通过互补试验将突变株划分为不同基因缺损的互补组；
❹通过功能试验，研究每个互补组在非许可条件下(如温度敏感株在39～40℃)复制障碍发生在增殖周期的哪一步；
❺将不同互补组突变株配对重组求出其重组率，如两株不同基因缺损的温度敏感株重组而产生野生株，可以简单地用在39～40℃计算蚀斑数的方法求出重组率；
❻按重组率高低求出突变基因的排列顺序和距离。如果这些突变株的功能障碍已经查明，每个基因所代表的功能也就清楚了。
生物化学方法原则上也可以分为六个步骤：
❶提纯病毒并提取病毒DNA;
❷限制性内切酶切割并进行葡聚糖凝胶电泳；
❸用双酶消化法分析片段的排列顺序，构成限制性内切酶图；
❹用已知的DNA片段与感染细胞内提取的病毒mRNA杂交，洗脱出相应的mRNA;
❺试管内翻译并从蛋白质的分子量、肽图、抗原性或酶功能鉴别其性质；
❻在限制性内切酶图上标明每个基因所编码的蛋白质及其功能。
遗传与生物化学结合的方法，即利用突变株、互补和重组等方法与限制性内切酶、电泳分析、核酸杂交等方法相结合，具体方法因病毒而不同。在DNA病毒中常用“标志拯救法”，例如在上述遗传方法
❶～
❸和生物化学方法
❶～
❸的基础上，用野生型的不同限制性内切酶片段分别与不同互补组的温度敏感株DNA重组，如某一片段与某温度敏感株的缺损部位相应，则通过重组可产生野生株，否则不产生。这样就可以确定每个突变在DNA上的位置。如果这些突变株的功能障碍已经查明，则每段DNA所代表的功能也可确定。
以上方法虽然主要适用于DNA病毒，但在某些情况下也曾用于构造RNA病毒的基因图，例如由于小RNA病毒也能发生重组，曾用遗传学方法构造了脊髓灰质炎病毒的基因图； 由于正粘病毒的RNA是分节段的，曾用遗传与生物化学相结合的方法构造了流感病毒的基因图。
近年来DNA序列分析技术有了飞速发展。有的病毒如SV₄₀和乙型肝炎病毒的整个DNA的核苷酸序列已经查明，从DNA序列上的翻译起始和终止密码子，结合已知的病毒蛋白质分子量及N或C端的氨基酸序列，往往可以直接推导出基因图。对RNA病毒，也可先反转录成DNA然后进行分析。