甲型血友病的基因诊断gene diagnosis of hemophilia A

甲型血友病是因凝血因子Ⅷ缺乏所致，呈性染色体隐性遗传。编码凝血因子Ⅷ的基因突变主要是点突变^*或少数碱基的缺失、插入。最多见的点突变位点是限制酶^*TaqI所识别的酶切位点^*TCGA，此位点中有二核苷酸CpG序列。在该位点的突变可产生多种无义突变^*和错义突变^*。此外，BclI和XbaI识别的酶切位点也是较常见的多态性位点。目前多采用PCR和RFLP相结合的方法即PCR/RFLP连锁分析法进行DNA检测与分析。常用两对引物分别扩增包含BclI和XbaI多态性位点序列的因子Ⅷ基因内DNA片断，然后分别用BclI或XbaI酶降解PCR产物，电泳后根据酶切图谱进行家系成员的基因连锁分析，检出携带者或作出产前诊断。酶切位点可通过设计特异的寡核苷酸探针进行点杂交来检测。例如用一对引物扩增Ⅷ因子基因第18外显子内一个142bp片段，该片段含一个BclI多态性位点，酶解后如果存在该BclI位点则产生99bp与43bp片段，反之仍为142bp片段。图为甲型血友病家系DNA用一对特异引物扩增的产物，经BclⅠ酶水解后的电泳示意图。该图可见，先证者只有142bp条带，其母有142bp和99bp条带，说明母亲不具有BclI酶切位点的等位基因片段，142bp片段与甲型血友病基因连锁。胎儿具有与母亲相同的图谱，用Y探针证实为女性，证明该胎儿是甲型血友病基因携带者。其99bp条带来自正常父亲，142bp条带只能来自母亲。由于该胎儿仅是携带者，出生后正常，因此产前诊断可以继续妊娠至分娩。