布鲁菌属

布鲁菌属(Brucella)是一类革兰阴性短小杆菌，由英国细菌学家Bruce于1866年首先发现羊布鲁菌，故名。菌长0.6～1.5μm，宽0.5～0.7μm。无芽胞，无动力。专性需氧。需要生长因子。DNA的G+C含量为56～58%。最易感染牛、羊、猪等家畜、引起母畜流产。人类感染后，长期发热、关节痛和全身乏力，并形成有菌免疫。初次分离时多呈小球状或球杆状。次代培养，猪和牛布鲁菌渐变成杆状，而羊布鲁菌趋于球状。光滑型菌株有荚膜。初次分离培养要求5～10%CO2环境，生长特别缓慢。固体培养基上培养48小时后才有可见菌落，菌落无色，稍隆起，表面光滑，边缘整齐，呈露珠状。本菌属通常不发酵糖类，如减少培养基中的氮源，增加糖的含量和大量接种细菌，在一定条件下可以发酵某些糖类，并可用以鉴别菌型(表1)。

表1 布鲁菌糖发酵的结果

型别	葡萄糖	甘露糖	麦芽糖	鼠李糖	蔗糖
牛型布鲁菌	+	-	-	+	-
羊型布鲁菌	+	-	-	-	-
猪型布鲁菌	+	+	+	-	+

各型布鲁菌对碱性染料的敏感性不同(表2)，亦具有定型作用。

表2 布鲁菌各菌型的一般特性

菌体有两种抗原，一是M抗原（即羊布鲁菌菌体抗原），另一为A抗原（即牛布鲁菌菌体抗原）。本属菌均含有A和M抗原，但含量不同，牛型菌A与M抗原之比为20∶1，羊型反之为1∶20，猪型介于两者之间为2∶1。此外，还有菌体表面的脂多糖抗原，可能与巴斯德杆菌、霍乱弧菌等有共同抗原性。
本菌抵抗力较强，在土壤中能存活24～40天，在干燥胎膜中存活时间更长，在病畜肉制品中存活40天，在羊毛中生存1.5～4个月，水中5～150天。阳光下直射20分钟或加热60℃10～30分钟可杀死。在普通浓度消毒剂内数分钟即死亡。在酸牛乳和干酪中需经一定时间的乳酸化后才被杀死。对链霉素、四环素、庆大霉素敏感，对磺胺药中度敏感，对青霉素敏感性较差。本菌经多次培养，细菌失去荚膜，菌落由光滑型变成粗糙型(S-R)。光滑型具致病性和完整的抗原性，生产菌苗和有关诊断制品均需采用光滑型菌株。可采用三胜黄素或热凝集试验以及菌落结晶紫染色法鉴定菌落是否光滑。
现知有60多种动物在自然条件下可感染布鲁菌，主要宿主是羊、绵羊、牛和猪，其次为骆驼、鹿、驴、骡和狗。各型布鲁菌仅侵犯一定动物种群，但也见广泛的宿主转移，如羊布鲁菌也可使牛和其他动物致病。病畜的粪、尿、精液、子宫腔排泄物、乳汁等含有大量病菌，可传播致病。各种家畜感染后，一般无明显症状，多属隐性感染。病变多局限于生殖器官，主要表现为流产、睾丸炎、副睾炎、乳腺炎、子宫炎、后肢麻痹、跛行。性成熟前家畜有一定抵抗力，孕期最为易感。人类对布鲁菌易感，感染菌型以羊型最为多见，猪型次之，牛型最少。病畜排出的病菌可通过皮肤、消化道、呼吸道、眼结膜等途径感染。人与人间不发生传染。临床有隐性感染、急性和慢性三种类型。病菌侵入机体，被吞噬细胞吞噬后可暂时停留在局部淋巴结而成为仅有抗体阳性的隐性感染。当感染菌量较大时，随淋巴液进入附近淋巴结，生长繁殖到一定数量后进入血液，此阶段为潜伏期，一般为2～3周。在菌血症期细菌的内毒素可引起病人发热、无力等中毒症状，此期血液培养阳性率高达70%，为急性感染。以后，细菌随血流入肝、脾、骨髓等细胞内寄生，血液中的细菌逐渐消失，血培养阳性率也随之降低，发热也渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时再次进入血液，又出现菌血症，体温再次上升，如此反复发作呈波浪式热型，临床上称为波浪热。由于细菌寄生于细胞内，治疗较难彻底，故易转为慢性和反复发作。转为慢性时，血液细菌培养阳性率很低，骨髓细菌培养阳性率较高，临床表现可有肝脾肿大、关节及肌肉疼痛等症状。严重者可造成关节强直型残废，男性患者发生睾丸炎和副睾丸炎失去生育能力，女性患者可引起月经失调，怀孕后发生流产。布鲁菌内毒素和菌体成分还可使机体致敏或形成免疫复合物等，引起变态反应性继发病变。布鲁菌感染后所形成的免疫，一般为有菌免疫，初次感染后体内存在病菌，对再次感染有较强的免疫力。可出现T细胞介导的免疫，但不强。患者病后体液中出现凝集素、沉淀素、调理素、补体结合抗体和血凝抗体等，主要是IgG和IgM，能增强巨噬细胞吞噬病菌和抑制胞内菌的生长。
本属菌所致疾病临床症状复杂，又多不典型，难与其他疾病鉴别，故细菌学诊断对于确定病原菌具有重大意义。
❶分离病原菌时，对急性期病人常取血，慢性期取骨髓，接种培养基后置5～10%CO2条件下培养，需持续培养30天，如仍无菌生长才报告阴性，若有细菌生长可根据培养特性、生化反应、染料抑菌试验等确定型别。
❷血清学检查常用凝集反应。患者发病1～7天后，血清中开始出现凝集素。一般以1∶160～1∶320为阳性诊断标准。若抗体效价再度上升，应考虑再次感染或复发。慢性患者还可以出现不完全抗体，又称阻断抗体，可阻止完全抗体与菌体发生凝集反应。需用抗球蛋白试验检测。有些实验室采用含巯基化合物，如二巯基乙醇等处理血清，破坏IgM后用凝集试验测定血清中IgG抗体，如处理后血清效价比处理前总效价降低20～30%以上，有诊断及鉴定菌苗免疫效果的意义。
❸用布鲁菌素作皮肤变态反应试验。布鲁菌素是用牛、羊、猪三型菌的30天肉浸液培养液，经80℃水浴加热1小时杀菌后，经除菌滤器除菌后制得。皮内注射24～48小时后观察。红肿浸润达1～2cm的为弱阳性，2×3cm为阳性，4×6cm为强阳性，如在6～8小时内红肿消失者为假阳性。
预防接种采用减毒活菌苗，所用菌苗有20多种，其中研究和使用较多的是牛型19，牛型19-13A，牛型104M和羊型REVI。其中牛型104M株毒力比19-13A株大，免疫力比19-13A株强。我国从1956年开始用19-13A制成冻干活菌苗于人群免疫，1966年起普遍改用104M冻干活菌苗，而且自己选育了羊5和猪2号两个强毒菌苗菌株，用以免疫羊和绵羊收到较好的效果。菌苗接种对象为疫区和有关职业性人群以及与传染源密切接触者，一般应在羊产羔期前2～3个月进行普遍免疫接种。由于该菌菌苗种剩余毒力比较大，只能作皮上划痕，严禁皮下使用，多次注射活菌可引起机体过敏状态，因此不宜在人群中反复接种布鲁菌活菌苗。急性期病人治疗以抗生素为主，治疗需彻底，以防止转为慢性。