厌氧菌检查
按对氧耐受程度不同将厌氧菌分为专性厌氧菌、微需氧厌氧菌和兼性厌氧菌。临床所称厌氧菌是指专性厌氧菌而言。这类细菌因缺乏细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化物,酶不能在有氧环境中进行代谢和生长。近年来由于广泛应用广谱抗生素、糖皮质激素类、免疫抑制剂和抗代谢药物及对厌氧菌分离和培养技术的改进,发现厌氧菌是常见的一类感染细菌,尤其多见于混合性细菌感染。
许多厌氧菌是寄生于人体体表和腔道的正常菌群。常见寄生皮肤的有类杆菌、丙酸杆菌、碱性弗氏球菌和厌氧链球菌等;阴道有产黑素类杆菌、产气荚膜杆菌和消化球菌等; 前尿道口有脆弱类杆菌、厌氧链球菌和乳酸杆菌等;下消化道有梭状芽胞杆菌、丙酸杆菌、乳酸杆菌、梭状杆菌和类杆菌等,故引起感染的厌氧菌多系体内寄生菌。自体外侵入的较少见,但若发生,则比较严重,如破伤风、气性坏疽和肉毒中毒等。因各种厌氧菌的性质不同,所产生的临床症状各不同,如产气荚膜杆菌可产生α毒素而造成溶血; 梭状芽胞杆菌可产生大量气体而引起气性坏疽;类杆菌可产生肝素酶而促进凝血等。
厌氧菌检查常用的方法是直接涂片法和培养法。采集厌氧菌检查的标本时,应避免或尽可能减少杂菌污染。如肺部感染灶,可通过支气管镜采取;体表软组织感染灶最好自深部采取脓液和渗液; 泌尿系感染可穿刺取脓液或以无菌技术采尿道分泌物;口腔、鼻咽、下消化道和阴道中杂菌较多,且易被寄生厌氧菌所污染,所以一般不采取粪便和这些部位的分泌物作厌氧菌检查。标本采集后,如作厌氧菌培养则应尽量避免与空气接触或迅速接种于特殊的培养基。一般都先直接涂片经Gram染色,初步了解细菌形态、染色性质及有无芽胞和菌量等。
厌氧菌的培养基分选择性和非选择性二种。非选择性培养基常用的是液体硫乙醇酸钠或疱肉肉汤培养基,此类培养基的缺点是可能有兼性厌氧菌生长。也可用心脑浸出液液体或固体培养基。选择性培养基是在以上培养基中加入微量的庆大霉素,以抑制多数兼性厌氧菌生长。将标本接种于上述培养基后,立即置37℃厌氧缸或袋中培养。厌氧缸或袋制备可用真空泵抽去空气充以氮气,或利用需氧菌能吸收氧气放出二氧化碳的原理,在一平碟上一半接种需氧菌,一半接种厌氧菌。也可用化学方法吸收氧气,如用焦性没食酸与氢氧化钾作用吸收氧气等方法。培养48h后,有细菌生长时再将其移种于含有半胱氨酸或葡萄糖等还原剂的兔血琼脂平碟上,在无氧环境中继续培养。48h后,选菌落涂片染色镜检或进一步作血清学或生化反应鉴定,以确定细菌类别。
厌氧菌的培养、分离和鉴定较为困难,而且需时间较长。因为这类细菌感染有的比较凶险,发展快,若等待培养结果会延误治疗。一般遇有以下情况,应考虑有厌氧菌感染的可能。
❶感染来源于口腔、结肠、阴道;
❷渗出物有腐败臭气;
❸与组织或癌肿坏死有关的感染;
❹感染部位的组织有气体或渗液中有气泡;
❺长期应用氨基甙类如链霉素、卡那霉素和新霉素等抗生素治疗无效的感染;
❻创口有黑色的含血渗液,置紫外线灯光下可发出荧光;
❼常规细菌培养阴性的脓液;
❽渗出物和脓液涂片染色有大量Gram阴性或阳性球菌和杆菌,而常规细菌培养无细菌生长。