维生素A棕榈酸盐和维生素A醋酸盐的测定

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高压液相色谱法

1．试剂和溶液

1．1 异丙醚 市售不添加稳定剂的异丙醚。

1．2 芘、正己烷液 称量芘50mg，放入50mL棕色容量瓶中，用己烷定容至50mL。取此液10mL，放入另一棕色瓶中，用己烷定容至50mL，此液含芘200μg／mL。

1．3 正己烷 色谱纯。

2．仪器

2．1 带紫外鉴定器的高压液相色谱仪。

2．2 0．45μm的膜过滤器。

2．3 实验室常用玻璃仪器。

3．测定方法

3．1 样液的制备。

3．1．1 油脂食品：与含维生素A200～500IU相当的样品，通常约取20g以下，放入50mL棕色容量瓶中，加20～30mL正己烷、1mL芘己烷液，用己烷定容至50mL，过0．45μm膜，滤液作样液用。

3．1．2 粉状或固体食品：与含维生素A200～300IU相当的样品，通常约取20g以下，放入50mL离心管中，加50℃水10～15mL，振荡均匀，再加乙醚10mL，振荡均匀，加20mL正己烷，振荡均匀。离心分离(10min，3000r／min)，取己烷层，准确加芘、己烷液1mL，过0．45μm膜，残留物用10mL己烷洗2次，离心分离，洗液过膜，滤液与己烷层合并，用己烷定容至50mL。

3．2 标准溶液的制备 维生素A棕榈酸盐标准品(1g含维生素A100万IU)。准确称取50mg，放入50mL棕色容量瓶中，用己烷溶解并定容至50mL，取此液5mL，放入50mL棕色容量瓶中，定容至50mL，作为维生素A棕榈酸盐(100IU／mL)或维生素A醋酸盐标准品(1g含维生素A100IU)。与上述维生素A棕榈酸盐标准品同样操作，作成维生素A醋酸盐标准液(含维生素A100IU／mL)。两种标准液任选一种，取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL分别放入50mL容量瓶中，并分别加入芘、正己烷液1mL，用正己烷定容至50mL，作标准曲线(此液1mL含芘4μg时，含维生素A棕榈酸盐或维生素A醋酸盐分别为2IU，4IU，6IU，8IU，10IU)。

3．3 测定。

3．3．1 测定条件：带紫外鉴定器的高压液相色谱仪测定条件为：

填充剂：硅胶

柱：内径约4．6mm，长250mm

柱温：40℃

流动相：正己烷：异丙醚：醋酸=194∶5∶1(体积比)

流速：1．0～2．0mL／min

波长：325nm

进样量：10μL

3．3．2 标准曲线的制作：注入标准液10μL，按维生素A棕榈酸盐或维生素A醋酸盐和芘的峰高比，作成标准曲线。

3．3．3 定量：取样液10μL，注入高压液相色谱仪，得维生素A棕榈酸盐和维生素A醋酸盐和芘的峰高比，从标准曲线上查出维生素A棕榈酸盐和维生素A醋酸盐的浓度(IU／mL)，然后计算样品中维生素A棕榈酸盐和维生素A醋酸盐的含量(IU／100g)。

式中 c——样液中维生素A棕榈酸盐浓度，IU／mL

m——取样量，g

式中 ρ——样液中维生素A醋酸盐浓度，IU／mL

m——取样量，g

样品中维生素A的含量是维生素A棕榈酸盐和维生素A醋酸盐含量之和。