紫外吸收法(经验公式快速测定法)

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蛋白质分子中所含的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基使蛋白质在280nm下具有最大吸收值，在无其它干扰物质时，280nm的吸光度即可作蛋白质的测定用，但不同种的蛋白质对280nm波长的光吸收强度因芳香性氨基酸残基含量的不同而有差异，1毫克／1毫升浓度的不同蛋白质的吸光度值在0．5～2．5之间。因此需用同种蛋白质作对照结果才可靠。

试剂和仪器

(1)0．9%NaCl溶液。

(2)751型紫外／可见光分光光度计。

操作步骤

此法适用于蛋白质浓度为0．1～0．5毫克／毫升。

1．样液测定：取未知浓度的蛋白液1．0毫升加0．9%NaCl3．0毫升，混匀。

以0．9%NaCl作空白调零点。在紫外分光光度计上分别测定样品液在波长280nm和波长200nm的光密度(用光径1厘米的石英比色杯盛溶液)。

2．计算：当从生物材料提取的蛋白质中含有核苷酸或核酸时，由于核酸的吸收峰值在260nm附近，故经验公式为：

式中：表示光径为1厘米的石英比色杯，在波长

280nm的吸光度。

表示光径为1厘米的石英比色杯，在波长

260nm的吸光度。

1．55和0．76：为经验公式的系数。

以上公式是将280nm的吸光度和260nm的吸光度各乘以系数，然后相减求得近似的蛋白质浓度。