水果、蔬菜汁中游离氨基酸含量的测定(摘自GB12292)

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(一)主题内容与适用范围

本标准规定了水果、蔬菜汁中游离氨基酸的提取净化及测定方法。

(二)测定原理

水果、蔬菜汁通过阳离子交换树脂，固定及净化氨基酸。用2mol／L氢氧化铵把氨基酸洗脱后，脱氨浓缩。用氨基酸分析仪测定含量。

(三)仪器设备

(1)氨基酸分析仪或高压液相色谱仪。

(2)玻璃柱 高20cm，内径2cm。

(3)捣碎机。

(4)离心机。

(5)天平。

(6)旋转蒸发器。

(7)真空干燥器。

(四)试剂

全部试剂均为分析纯，配制试剂均用去离子水。

(1)阳离子交换树脂 Dowex50W×4型，100～200目，或其他适宜的树脂。

(2)盐酸溶液 6mol／L，0．1mol／L。

(3)氢氧化铵溶液 2mol／L。

(4)氢氧化钠溶液 3．5mo1／L。

(5)每种氨基酸标准溶液 0．0025mol／L。

(6)仪器分析用的各种缓冲液。

(7)仪器分析用的茚三酮试剂。

(五)试样选取和制备

(1)液体产品 需充分混匀。

(2)固体产品 选取有代表性的水果和蔬菜洗净，擦干，剥去或削去果皮，用四分法取样150g左右。

(3)称样 称取样品100～150g，准确至0．01g，置于捣碎器的玻璃缸内，加入等量的水。

(4)样品捣碎 将盛样品的玻璃缸装在捣碎机上，在1档速度捣碎1min，取出倒入烧杯中。

(5)过滤及离心 把已捣碎的样液过滤，吸取10mL滤液放入离心管中，在4000rmin的转速下离心15min。

(6)脱果胶 对含果胶丰富的样液需用乙醇处理，准确吸取样液5mL，加入34mL96%乙醇，过滤，用15mL80%乙醇分三次冲洗滤纸，将滤液在35℃下减压蒸馏。

(六)分析步骤

1．固定柱的装置

将Dowex50W×4树脂装入玻璃圆柱中，离上端空出约10cm，用6mol／L盐酸250mL活化树脂，然后用水洗至无氯离子为止(用硝酸银检查，不产生白色沉淀)。调节活塞，使溶液流速为1mL／min。

2．固定及洗脱

吸取5mL样液或液体产品，除果胶物的样液则取全部，置玻璃圆柱中，再加5mL水，待液体通过树脂后再加2mol／L氢氧化铵50mL，可分3～4次加完，用50mL水洗涤，将加2mol／L氢氧化铵流出的溶液收集在圆底烧瓶内，在减压真空和加热(40～45℃)条件下蒸发至干，用5mL0．1mol／L盐酸溶解。

3．脱氨

吸取待测液1mL，加入3．5mol／L氢氧化钠溶液2～3滴，调至pH10～11，放在真空干燥器中减压蒸干。用1mL水洗涤，再抽真空蒸干。这样重复2次，加入pH2．2缓冲液0．5mL和0．1mol／L盐酸0．5mL，使pH达到2．2，再稀释5～10倍后测定。

4．测定

用氨基酸分析仪测定氨基酸含量，测定前需做2～3个氨基酸标样，待仪器稳定后再测试样。

(七)结果计算

1．结果表示

用mg／kg或mg／L。

2．计算公式

式中 N_g——从仪器测得的某个氨基酸的质量，N_g

m——新鲜样品重，g

mL——原始取样体积，mL

d——稀释倍数

3．允许差

水果、蔬菜汁游离氨基酸平行测定的结果，相对偏差不得大于5%。