果蔬汁饮料中L－抗坏血酸的测定方法——乙醚萃取法(摘自GB12143．3)

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(一)主题内容与适用范围

本标准规定了使用2，6－二氯靛酚滴定－乙醚萃取法测定果蔬汁饮料中L－抗坏血酸含量的方法。

本标准适用于浓缩果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁饮料、果蔬汁碳酸饮料及果蔬汁固体饮料中L－抗坏血酸的测定，尤其适用于深色果蔬汁饮料中L－抗坏血酸的测定。但不适用于脱氢抗坏血酸的测定。

(二)原理

本法根据氧化还原反应原理，2，6－二氯靛酚能被L－抗坏血酸还原为无色体，微过量的2，6－二氯靛酚用乙醚提取，然后由醚层中的玫瑰红色来确定滴定终点。

(三)试剂

所用的试剂均为分析纯，所用的水均为蒸馏水或同等纯度的水(以下简称水)。

(1)丙酮 符合GB686。

(2)乙醚 符合HG3－1002。

(3)10%硫酸铜溶液 称取10g硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)溶解于水，并稀释至100mL。

(4)2%草酸溶液 称取20g草酸(C₂H₂O₄·2H₂O)溶解于水，并稀释至1L。

(5)碘标准滴定溶液 按GB601第二章第10条配制与标定，贮存于棕色瓶中。

(6)碘标准滴定溶液 将碘标准滴定溶液在使用时稀释V_25mL→V_250mL，浓度以c₁表示。

(7)0．88mg／mL抗坏血酸标准溶液 称取0．22g抗坏血酸，用2%草酸溶液溶解并稀释到250mL。

标定：吸取抗坏血酸标准溶液20．00mL，加0．5%淀粉指示液1mL，用碘标准滴定溶液滴定至呈微蓝色为止。

式中 c₂——L－抗坏血酸溶液的浓度，mg／mL

c₁——碘标准滴定溶液的浓度，mol／L

V₁——标定时所用碘标准滴定溶液的体积，mL

碘标准滴定溶液相当于L－抗坏血酸的毫克数

(8)0．088mg／mLL－抗坏血酸标准溶液：吸取0．88mg／mLL－抗坏血酸标准溶液25．00mL，用2%草酸溶液稀释，V_25mL→V_250mL。

注：L－抗坏血酸溶液在使用时配制。

(9)2，6－二氯靛酚标准滴定溶液：称取200mg2，6－二氯靛酚，用少量热的重蒸馏水湿润，然后再慢慢加入热的重蒸水，搅拌溶解，过滤。冷却后，滤液用重蒸馏水稀释到1L。保存于冰箱中。一星期至少标定一次。

标定：吸取10．00mLL－抗坏血酸标准溶液置于50mL比色管中，按测定样品的步骤标定2，6－二氯靛酚溶液的滴定度。

式中 F——2，6－二氯靛酚溶液的滴定度，即1mL2，6－二氯靛酚溶液相当于L－抗坏血酸的毫克数，mg／mL

m——10mLL－抗坏血酸标准溶液中含抗坏血酸的量，mg

V——标定时所用2，6－二氯靛酚溶液的体积，mL

(10)5g／L淀粉指示液：称取0．5g可溶性淀粉，用5mL冷水调匀，将所得乳浊液在搅拌下徐徐注入100mL沸腾着的水中，再煮沸2～3min，使溶液透明。加0．1g碘化汞作保存剂。

(四)仪器

实验室常用仪器及下列各项：

(1)10mL微量滴定管。

(2)50mL、100mL比色管。

(3)125mL分液漏斗。

(五)试液的制备

水果、蔬菜中抗坏血酸的含量见附录A。

1．浓缩汁

在浓缩汁中加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水，使成为原汁。然后同原汁一样取一定量样品，稀释、混匀供测。

2．原汁

称取含抗坏血酸4～10mg有代表性的样品(精确到0．001g)，用2%草酸溶液稀释到200mL，混匀供测。

3．果汁饮料、果蔬汁水

(1)抗坏血酸含量在0．05mg／mL以下的样品，混匀后直接取样测定。

(2)抗坏血酸含量在0．05mg／mL以上的样品，称取含抗坏血酸4～10mg有代表性的样品(精确到0．001g)，用2%草酸溶液稀释到200mL，混匀供测。

4．果蔬汁碳酸饮料

先将样品旋摇到基本无气泡后，按(3)条制备。

5．固体饮料

称取含抗坏血酸4～10mg有代表性的样品(精确到0．001g)，用2%草酸溶液溶解并稀释至200mL，混匀供测。

6．乙醚抽提处理

对于高度乳化或样液色泽较深且易被乙醚抽提的样品，取样后置分液漏斗中。加30mL乙醚，充分振摇但勿使之乳化。待分层后将下层样液放入200mL容量瓶中，分液漏斗中加入20mL2%草酸溶液。适当振摇，待分层后，将下层水溶液放入上面的200mL容量瓶中。如此反复操作4次，将每次的下层水溶液均放入200mL容量瓶内，然后用2%草酸溶液稀释至刻度。

7．空白试液的制备

按试液制备中所确定的取样量称取同一样品(精确到0．001g)，置于250mL锥形瓶中，加20mL10%硫酸铜溶液，加水使总体积约为100mL，置于垫有石棉网的电炉上，小心加热至沸并保持微沸15min，然后用流动水冷却到室温。将此溶液转移到200mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，供空白测定。

(六)分析步骤

1．试液的测定

取10～15支50mL比色管，在每支比色管中加入10．00mL按(五)制备好的试液，各加2．5mL丙酮。放置3min后，在第一支比色管中加入1mL2，6－二氯靛酚溶液，充分混匀，精确控制40s后，加入2mL乙醚，充分振摇，放置几分钟，待乙醚与水溶液分层后，观察醚层有无出现玫瑰红色。当出现淡玫瑰红色时，则表明已达到测定的暂定终点。如果2，6－二氯靛酚全部被抗坏血酸还原，乙醚层保持无色，则在第二支比色管中加入1．5mL2，6－二氯靛酚溶液。如还不显红色，再逐一按2．0、2．5、3．0、3．5、4．0、4．5、5．0mL的量加入2，6－二氯靛酚溶液，直到乙醚层出现玫瑰红色达到暂定终点为止。这时所加的2，6－二氯靛酚的量常常是过量的，所以需进一步试验，确定精确的终点。

如果加到3．0mL2，6－二氯靛酚溶液时出现玫瑰红色，则从第六支加有试液的比色管中开始分别加入2．6、2．7、2．8、2．9mL2，6－二氯靛酚溶液，直至呈现淡玫瑰红色为止。如在2．9mL刚呈红色，则2．9mL为精确终点。如加到2．9mL2，6－二氯靛酚溶液仍不显玫瑰红色，则上面的3．0mL就是精确终点。所用2，6－二氯靛酚溶液为a毫升。

对于抗坏血酸含量低于2mg／100g的样品，用100mL比色管直接加倍取样测定。丙酮与乙醚的加量也相应加倍，操作同上。

对于同一个被测样液需平行测定三次。

2．空白试液的测定

吸取空白试液10．00mL于比色管中，同分析步骤1加丙酮并逐一按0．05、0．10、0．15、0．20mL的量加入2，6－二氯靛酚溶液，测得在乙醚层中刚呈现玫瑰红色所需的2，6－二氯靛酚溶液的量为b毫升。

(七)结果的表示

1．计算式

式中 X——100g(或mL)样品所含L－抗坏血酸的毫克数，mg／100g或mL

a——测定试液时所需2，6－二氯靛酚溶液的体积，mL

b——测定空白试液时所需2，6－二氯靛酚溶液的体积，mL

F——2，6－二氯靛酚溶液的滴定度，mg／mL，即每mL此溶液相当于L－抗坏血酸的mg数

m——10mL试液中所含样品的量，g或mL

注：以误差在允许范围内的三次测定结果的算术平均值报告结果，精确到小数点后第一位。

2．允许误差

同一样品三次测定结果的相对偏差为：其抗坏血酸含量大于或等于10mg／100g的样品应小于2%，含量小于10mg／100g的样品应小于5%。

附录A 水果、蔬菜中抗坏血酸含量

(参考件)

表A1 单位：mg／100g

注：本表摘自《食物成分表》，1985年版，中国医科院卫生研究所编。