(3)节瓜和土壤中残留量检测方法

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广东省农业科学院植物保护研究所 孙海滨 刘艳萍

样本用甲醇提取，二氯甲烷液-液分配，弗罗里硅土和活性炭柱层析净化，液相色谱法(DAD)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 二极管阵列检测器(DAD)

旋转蒸发器

高速组织捣碎机

层析柱 Φ10mm×210mm

2．主要试剂

甲醇(色谱纯)、甲醇、正己烷、二氯甲烷、无水硫酸钠、活性炭、弗罗里硅土(Florisil)

缓冲液 0．01mol／L磷酸二氢钠，pH2．5

吡虫啉标准品

3．检测步骤

3．1 提取

称取40．0g(净重)匀浆节瓜样本(瓜肉40．0g、土壤40．0g)，放入250mL三角瓶中，加入80mL甲醇，浸泡4h，振荡30min，经助滤剂抽滤。滤渣用60mL甲醇振荡提取，抽滤，合并抽滤液。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将滤液移入500mL分液漏斗中，加入25mL饱和氯化钠水溶液和50mL去离子水，用40mL×2正己烷洗涤，弃去正己烷相。用30mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水后，用旋转蒸发器(50℃)减压浓缩至少许。

3．2．2 柱层析净化

在层析柱中依次加入2g弗罗里硅土、2g活性炭和1cm无水硫酸钠层。用少许正己烷将提取浓缩液移入层析柱中，用50mL二氯甲烷淋洗，弃去。用80mL甲醇／二氯甲烷(5∶95，V／V)洗脱并收集。洗脱液用旋转蒸发器(50℃)减压浓缩至少许，经气流吹干后，用甲醇定容至1mL，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 DAD

波长 270nm

色谱柱 ODSHypersilC₁₈，250mm×4mm×5μm

温度 30℃

流动相 甲醇／缓冲液(15∶85，V／V)，保持4min，梯度变换20min至甲醇／缓冲液(85∶15，V／V)，保持5min

流速 0．8mL／min

进样量 10μL

保留时间 14．5min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 5×10^－10g。

最低检测浓度 0．01mg／kg。

回收率 节瓜全瓜、瓜肉和土壤中添加吡虫啉0．02～2．00mg／kg时，平均回收率分别为85．7%～95．6%、84．1%～91．0%和86．9%～90．3%，见表1-21-5。

相对标准偏差 2．2%～11．8%，见表1-21-5。

表1-21-5 节瓜和土壤中吡虫啉添加回收率及相对标准偏差实验结果