芦笋和土壤中残留量检测方法

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上海市农业科学院植物保护研究所 王伟民 盛亚红

样本用盐酸胍、2mol／L氢氧化钠甲醇溶液提取，三氯甲烷萃取，硅胶柱层析净化，液相色谱法(FD)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 荧光检测器(FD)

蠕动泵

高速组织捣碎机

国际型振荡器

电热恒温水浴锅

pH计

2．主要试剂

甲醇(优级纯)、三氯甲烷、冰乙酸、高氯酸、氨水、去离子水、茚三酮、盐酸胍、氢氧化钠

硅胶 层析用，100～200目，450℃焙烧4h。

淋洗液 甲醇／水／25%氨水(32∶65∶7，V／V／V)，用高氯酸调节pH为2．0

双胍辛烷苯基磺酸盐标准品、双胍辛烷苯基磺酸盐衍生物、内标物99．2%

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 芦笋

称取40g切碎的样本，加入0．5g盐酸胍和100mL2mol／L氢氧化钠／甲醇溶液，高速匀浆1min，抽滤。滤渣重复提取一次。用50mL2mol／L氢氧化钠／甲醇溶液，100mL三氯甲烷洗涤滤渣，合并滤液。

3．1．2 土壤

称取10g土壤，置于磨口三角瓶中，加入0．5g盐酸胍，80mL2mol／L氢氧化钠／甲醇溶液，在振荡器提取1h，抽滤。分别用20mL2mol／L氢氧化钠／甲醇溶液和100mL三氯甲烷洗涤滤渣，合并滤液转入500mL分液漏斗中。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

3．2．1．1 芦笋

取1／2滤液(另一半备用)倒入500mL分液漏斗中。加入150mL去离子水和2mL5mg／kg内标，振摇3min。用50mL、30mL三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷相。

3．2．1．2 土壤

加入2mL5mg／kg内标和100mL去离子水振摇3min，收集三氯甲烷相。水相用50mL、50mL三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷相。

3．2．2 柱层析净化

在三氯甲烷相中加入约3mL0．1N乙酸／甲醇溶液至清澈透明。将该溶液倒入装有1g硅胶的玻璃层析柱中，待全部流出后，依次用0．5mL甲醇、8mL0．1N醋酸钠溶液、1mL淋洗液淋洗，弃去。再用10mL淋洗液洗脱并收集，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 FD

激发波长 395nm

发射波长 500nm

色谱柱 VP-ODS4．6mm×150mm，带预柱

柱温 60℃

流动相 甲醇／水／25%氨水(34∶64∶2，V／V／V，pH=2．5)

流速 0．7mL／min

柱后衍生 1mol／L氢氧化钠，流速0．6mL／min

0．15%水合茚三酮，流速0．6mL／min

反应温度60℃

保留时间 双胍辛烷苯基磺酸盐衍生物5．9min，内标为14．5min

4．结果计算

内标-标准曲线法定量双胍辛烷苯基磺酸盐衍生物

双胍辛烷与衍生物的分子量之比为2．5∶1

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1×10^－9g。

最低检测浓度 芦笋0．02mg／kg，土壤0．05mg／kg。

回收率 芦笋中添加双胍辛烷苯基磺酸盐0．1～3．0mg／kg时，平均回收率为73．3%～90．0%；土壤中添加双胍辛烷苯基磺酸盐0．2～5．0mg／kg时，平均回收率为74．0%～100．0%。见表2-17-1。

相对标准偏差 4．3%～9．1%，见表2-17-1。

表2-17-1 芦笋和土壤中双胍辛烷苯基磺酸盐添加回收率及相对标准偏差实验结果