糙米、植株、土壤和田水中残留量检测方法

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湖南农业大学农业环境保护研究所 杨仁斌 郭正元 肖曲 贺德春 龚道新

样本用二氯甲烷提取，弗罗里硅土柱层析净化，液相色谱法(紫外)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转蒸发器

组织捣碎机

恒温水浴振荡器

层析柱 1．5cm i．d．×30cm

2．主要试剂

甲醇(光谱纯)、二氯甲烷、浓硫酸、无水硫酸钠、硼砂、碳酸氢钾、碳酸钠

弗罗里硅土 经650℃烘4h，加5%水减活

二氯喹啉酸标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤

称取50g样本置于具塞三角瓶中，用60mL0．01mol／L硼砂溶液和80mL甲醇振荡提取，抽滤。

3．1．2 糙米

称取50g粉碎的糙米样本置于具塞三角瓶中，用80mL甲醇及60mL0．01mol／L硼砂溶液振荡提取，抽滤。将滤液转移至分液漏斗中，用50mL二氯甲烷洗涤，弃去二氯甲烷相。

3．1．3 植株(稻秧和稻草)

称取20g经粉碎的稻草样本置于具塞三角瓶中，用100mL饱和碳酸钠溶液和100mL二氯甲烷于40℃恒温振荡提取30min，抽滤。滤液转移至分液漏斗中，弃去二氯甲烷相。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

3．2．1．1 田水

量取300mL经过滤的水样于分液漏斗中，用硫酸调节pH1～2，用70mL、50mL、30mL二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷相并经无水硫酸钠脱水，浓缩至1mL，用氮气流吹干。用甲醇／水(0．25 %醋酸)(45∶55，V／V)定容后，待测。

3．2．1．2 土样

滤液转移至分液漏斗中，用硫酸调节pH1～2，并用50mL、30mL、20mL二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷相，用50mL、40mL、30mL饱和碳酸氢钠溶液反萃取3次。合并碳酸氢钠溶液，用浓硫酸调节pH1～2，再用50mL、30mL、20mL二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水，浓缩至1mL，用氮气流吹干，用流动相❶ 定容后，待测。

3．2．1．3 糙米和植株

提取液用浓硫酸调节pH1～2，用50mL、30mL、20mL二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷相，用50mL、40mL、30mL饱和碳酸氢钠溶液反萃取3次。合并碳酸氢钠溶液，用浓硫酸调节pH为1～2，再用50mL、40mL、30mL二氯甲烷萃取3次。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水，浓缩至1mL左右。

3．2．2 柱层析净化

将装有5g弗罗里硅土的层析柱用甲醇／二氯甲烷(1∶9，V／V)预淋。样本浓缩液上柱后，用甲醇／二氯甲烷(4∶6，V／V)洗脱，收集50mL洗脱液，浓缩至少量，氮气流吹至近干，用光谱纯甲醇定容后，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV，240nm

色谱柱 ODSHypersil，250mm×4．0mm×5μm不锈钢柱

柱温 30℃

流动相❶  甲醇／水(含0．25%醋酸)(45∶55，V／V)，流速0．8mL／rnin

流动相❷  甲醇／水(45∶55，V／V)，流速0．8mL／min

进样量 20μL

保留时间 流动相❶ 3．01min，流动相❷ 1．62min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 3×10^－9g。

最低检测浓度 糙米、稻草0．02mg／kg，植株0．05mg／kg，土壤0．025mg／kg，田水5．0×10^－5mg／L。

回收率 糙米、植株、田水和土壤中添加二氯喹啉酸0．05～2．00mg／kg，平均回收率分别为84．0%～92．1%、78．3%～88．8%、86．0%～95．5%和81．7%～103．4%。见表3-33-1。

相对标准偏差 3．6%～11．9%，见表3-33-1。

表3-33-1 水、土壤、糙米和植株中二氯喹啉酸添加回收率及相对标准偏差实验结果