血细胞碱性磷酸酶染色

碱性磷酸酶 (ALP)是成熟粒细胞溶酶体中重要酶之一，当细胞功能活跃时酶活性增加。碱性磷酸酶染色方法主要有两类： 一类是依据形成CaHPO₄沉淀的金属盐法，即在适宜的pH9.0～9.8条件下，ALP经镁离子激活，将底物作用液中的β-甘油磷酸钠水解，产生磷酸根离子，进而与氯化钙作用，生成不可溶性的CaHPO₄,Ca⁺⁺可和Co⁺⁺、Ag⁺⁺、Pb⁺⁺相置换，继而与硫化铵生成相应的黑色产物，沉淀于胞浆中。其中以钙-钴法最常用。另一类是同时偶联偶氮的方法，依据血细胞中存在有活性的酶，在适当pH条件下，可将底物液中的萘酚磷酸酯水解，释放出萘酚，并立即与重氮化盐偶联，与有活性的酶形成不溶解的有色沉淀。其中萘酚磷酸酯法显示的ALP活性，酶的纯化丢失较少，温育时间缩短，定位较精确，阳性产物不扩散。其方法是： 将新鲜血或骨髓涂片，在冷的甲醇甲醛中固定5s，水洗后放入含有5mg/dl浓度的萘酚AS-MX及1mg/ml偶氮盐的作用底物中，37℃保温2h，取出涂片，洗去片底浮色，用复染液染核后，在显微镜下检查，出现浓蓝颗粒者为阳性。ALP活性仅见于成熟或接近成熟的中性粒细胞。计数100个中性粒细胞中阳性细胞数，称阳性率。还可按阳性细胞中的颗粒密度分为1～5级，指数各为1～5。计算100个中性粒细胞，将每个细胞的指数相加，其总和称阳性指数或积分，作为判断酶活性的半定量的指标。由于方法及条件的不同，正常差别很大，故每次检查时应作正常对照。本法的正常值阳性率为60～99%，阳性指数169～367，平均为274。观察ALP活性主要有助于：
❶区别感染性质：细菌感染性疾病，特别是化脓性感染时，ALP活性明显增高； 病毒感染及非细菌感染时，则减少或正常；
❷区别慢性粒细胞性白血病与类白血病反应： 类白血病反应时，ALP活性一般增高。慢性粒细胞性白血病时，ALP活性减低。肿瘤伴有细菌感染时，ALP活性增高；
❸鉴别白血病类型： 急性或慢性粒细胞白血病时，ALP活性一般均降低甚至消失；急性淋巴细胞性白血病时，粒细胞ALP活性增高；红白血病时，活性减低。此外，机体处于应激状态，如外科手术后，应用皮质激素等，ALP活性可增高，各种贫血时一般也可增高。