脑脊液淋巴亚群的检测方法cerebrospinal fluid lymphocyte subpopulation inspect method

CSF细胞学主要检测方法之一。CSF淋巴细胞来源于血液，因而检查方法与血液基本无异。T淋巴细胞的检测：总T细胞通常采用E花环法，即用绵羊红细胞作指示细胞，检测与绵羊红细胞形成花环的淋巴细胞。有人用非特异性酯酶染色法计数T细胞。单克隆抗体免疫荧光技术可检测总T细胞、抑制性T细胞和辅助性T细胞。在70年代中后期也有人用检测有IgG或IgM FC受体的T细胞方法，分为抑制性或辅助性T细胞。B淋巴细胞常用荧光抗体法检测具有smlg的淋巴细胞的方法来计数，也可用EA花环法检测。B淋巴细胞的检测，在外周血通常采用混合花环法直接计数，因Manconi和Naess证实CSF中绝大多数淋巴细胞为T细胞，所以他们先计数T细胞再计数B细胞来间接计数D细胞。NK细胞的检测：该细胞是采用Cr⁵¹释放试验或琼脂单细胞毒试验法测定。侯、周二氏在外周血试验的基础上，改进建立了一种可同时检测CSF中T.B.D和N淋巴细胞的E-YC混合花环法，可在一份标本同时计数四种淋巴细胞。本法的机制是用绵羊红细胞(E)和酵母菌补体复合体(YC)作为指示细胞。酵母菌通过激活补体旁路后固定补体而与C₃的裂解产物C₃b结合形成YC复合体。该复合体可与具有补体受体的细胞，主要是B细胞结合形成花环。而绵羊红细胞可与T细胞形成花环。同时有上述两种指示细胞结合的双花环细胞即为D细胞。而N细胞则无相应的指示细胞与其结合。这样通过染色性质及指示细胞大小形态不同，可在一张玻片上计数T、B、D和N淋巴细胞。CSF细胞的混合花环法：在已制备好的淋巴细胞悬液中先后加入1%的绵羊红细胞悬液和YC₃复合体各0.05ml混匀后，置37℃水浴15min后，低速离心(800rpm)5min，置4℃共育2h以上。取出后，小心取少量上清液，轻轻打匀后加入0.8%的戊二醛(pH7.2)1滴，4℃再固定15min，涂片干燥后，MGG染色，高倍镜和油镜下计数100只淋巴细胞。凡结合3个或3个以上绵羊红细胞者计数为T细胞，结合2个或2个以上酵母菌者计数为具有补体受体的B细胞，具有上述两种表面标记者计数为D细胞，无上述两种标记者计数为N细胞。CSF的淋巴细胞亚群正常值，国内T细胞为77.2±6%,B细胞8.0±1.7%,D细胞2.4±1.4%,N细胞13.0±5.7%。在多发性硬化者T细胞增高B细胞减少；急性视神经炎T细胞高于外周血而B细胞低于外周血；格林-巴利综合征T、B细胞增加，N细胞下降；重症肌无力者T细胞增高；散发性脑炎T细胞明显上升，B、N细胞下降。急性细菌性脑膜炎T细胞增高，B细胞也高于对照组；结核性脑膜炎T细胞明显升高，N细胞下降；中枢神经系统恶性肿瘤T细胞明显下降。