纸色谱法

最简单的色谱方法。把需要分离和认定种属的物质试液滴在作为固定相的纸上，浸入作为流动相的溶剂或混合溶剂中。展开后，通过各个组分不同的比移值确定物质的不同组分。依操作方法不同分为两类：垂直型和水平型。前者因采用仪器不同，试液分别上行和下行展开，在悬挂的纸上形成一连串色点；后者滤纸呈水平状，试液在纸面向四周扩散，分离后生成许多同心圆圈。化合物的分配系数不同，扩散的速度和距离也不相同。每种化合物的扩散速度与溶剂扩散速度之比就是该化合物的比移值。或者说，比移值表示试液展开距离与溶剂展开距离之比。不同化合物在不同色谱条件下的比移值可以在化学手册中查到。为更准确地认定物质种属，可同时做标准样品试验，二者色点位置、颜色相同则表示同属一类。纸色谱法具有方法简便、费用低廉、可分析微量样品等优点；但分析不够准确，难以直接做定量分析。在物证检验中，基本上已被薄层色谱和气相色谱替代。在刑事化验历史上，曾被广泛应用于毒物、毒品和燃料等化合物的分析。

纸色谱法

纸色谱法是以纸为载体的色谱方法，固定相一般为纸纤维上吸附的水份，也可用纸吸留其他物质，如甲酰胺、缓冲液等，流动相为不与水相混溶的有机溶剂。分离原理属于分配色谱范围，即利用不同组分在两相中的分配系数不同而使之分离。一般操作为将样品溶液点在滤纸条一端，置密闭槽中用适宜溶剂进行展开，俟溶剂移至前沿，将纸取出，溶剂挥散后，如为无色物质可用显色剂喷雾或其他适宜方法确定斑点位置。展开有上行、下行及径向等方式。即溶剂流动方向分别为自下向上、自上而下及自圆心向四周（或类似于弧形）的方式。也有双向展开，即将样品点在方形滤纸的一角，展开一次后，将纸转动90°，再以同一溶剂系统或另一种系统展开。这种展开方式的分离效果较单向展开更好些。
样品经分离后，常用比移值Rf来表示各组分在色谱图中的位置。
如图：
在一定条件下，Rf为常数，可作为物质定性的基础。斑点定位以后也可将斑点剪下洗脱定量，定量的方法大多采用比色法、紫外分光法，也可用光密度计直接测定色斑的浓度。
纸色谱法需用样品量少，分离效率较高、操作简便，展开一次一般约几十分钟至十几小时，不需用复杂设备。因此广泛应用于生物化学、生理学、有机化学、天然药物化学、临床医学及药物分析等学科。特别是对氨基酸、多肽、糖类、色素、激素、核苷酸及核碱等的分离，动植物和菌体内的新陈代谢、天然化合物结构等的研究都起到重要作用。近年来，由于发展了薄层色谱，它比纸色谱有更多的优点，如展开时间较短，可使用多种显色剂等，因此纸色谱应用逐渐减少，有被薄层色谱取代的趋势。