病毒提纯
病毒的提纯是指从病毒的受染细胞悬液中提取病毒，进行浓缩和纯化。纯化病毒的目的是，进行电子显微镜检查，观察病毒的形态及物理结构；进行化学分析，测定病毒的分子量，研究病毒的化学组成，以了解其化学本质；分离提纯病毒的核酸和蛋白质亚单位，分析蛋白质亚单位的氨基酸排列序列及核酸的核苷酸排列序列； 研究病毒遗传、变异的本质；制备单价抗原，研究单价疫苗，或混合多价疫苗的效果；分离、提纯基因，进行病毒基因工程研究，等等。
对病毒提纯的基本要求是：
❶要将病毒浓缩到一定程度，例如浓缩到每毫升悬液中含病毒1010～1012个感染单位(PFU,TCID50或EID50);
❷尽可能多地除去污染物质如细胞碎片及亚细胞器等杂质；
❸必须保留病毒原来的结构、感染性及抗原性等生物学活性。
病毒纯净程度的标准是：
❶均一性。用电子显微镜检查、测定病毒材料在凝胶电泳的迁移率（包括等电聚焦）、扩散常数、沉淀常数或溶解常数等的均一性来检验病毒的纯净程度，是比较可靠的方法。均一性程度越高，说明纯度越高。但是杂质含量在1%以下者用均一性实验仍不容易分辨。
❷测定病毒材料的蛋白质含量与感染力的比值。提纯病毒材料的感染力与其蛋白质含量比值越大时，说明病毒的纯度越高。
❸免疫学反应。这是利用病毒的抗原特异性反应以检测纯度的方法。但必须强调： 有些污染物质不产生抗体，用免疫学方法检验不出。
❹结晶。只含有核蛋白的病毒在十分纯净的状态下，也和其他蛋白质一样，能够产生结晶。故结晶可以作为纯净标准之一。但是有时混有少量杂质时也可以产生结晶。
总之，没有一个鉴定病毒绝对纯度的唯一可靠标准，实验时必须同时观察几个指标来决定其相对的纯净度。
病毒的提纯，经常采用下述一种或二种以上的方法相辅进行，究竟采用哪几种方法还需根据实验的目的和要求而定。总的说来，下述方法中以密度梯度离心效果比较理想，手续比较简便，产量也比较大。但往往需要用其他方法作为辅助（如琼脂糖凝胶电泳和层析方法等），以获得理想的效果。常用的方法有下列数种。
分级离心 从受染的组织培养液或鸡胚尿囊液中浓缩及提纯病毒，较简便的方法是：先用800～10,000×g (g为地心引力，800～10,000×g即800～10,000倍于地心引力，约2500～8000rpm，根据病毒的大小而定)低速离心除去较大的组织碎片，再将上清液用30,000～300,000×g(约27,000～75,000rpm)离心，使病毒沉淀。再加入原体积1/10～1/100的缓冲液，用研磨、超声波分散或机械捣碎等方法使沉淀重新悬浮。这样，第一个循环可能仍留下少量杂质。要得到较好的纯度还必须按上述方法，再用从低速到高速（或超速）离心反复一二次，可达到浓缩和比较纯净的目的。
界面离心分离 病毒材料经低速离心后，将上清液铺加于一定浓度的蔗糖溶液梯层上 (比如25%和50%的蔗糖溶液)，构成上下的密度不同界面，然后以30,000～300,000×g离心，病毒便会根据其密度的不同沉淀在蔗糖溶液下面或浮在界面上 （根据实验要求选用不同浓度的蔗糖溶液）。也可重复数次，使病毒与密度不同的杂质分离开。此法亦称为“垫层”离心。
密度梯度离心 将经低速和高速离心后的病毒材料，铺加在用不同浓度的蔗糖或氯化铯配制的梯度溶液上面，用30,000～300,000×g离心，病毒和其他密度不同的细胞碎片即按其密度分别沉淀在不同的梯度中。也须反复离心一、二次。
等速区带密度梯度离心技术是梯度离心法的进一步发展，它可以进行大量的连续的分离提纯。
超过滤 离心法是根据密度大小来纯化病毒的，超过滤则根据颗粒的大小来提纯。病毒材料在进行超过滤前也须先进行低速离心，然后再用不同孔径的火棉胶滤膜在压力下过滤。最后用另一孔径比病毒小的滤膜过滤以去除水分而浓缩之。亦可用聚乙二醇(分子量为6,000道尔顿)吸除水分浓缩之。
柱层析纯化 低速或高速离心后的病毒悬液，用葡聚糖凝胶G150～G200(或生物胶P100～P300)柱层析，收集含病毒的部分，再用超高速离心沉淀或用聚乙二醇(分子量为6,000道尔顿)除去水分浓缩之。此外，还有磷酸钙柱、氢氧化铝柱、各种离子交换剂柱层析以及亲层析法等，可根据病毒的性质不同而选用之。用本法提纯时亦可反复进行一、二次，以期得到纯净的病毒材料。
琼脂糖凝胶电泳 用琼脂糖2B或4B作凝胶电泳，可将病毒及细胞碎片按其大小与所带电荷的差异而分开，大小与电荷相同的颗粒集中在同一个凝胶层中，因而纯化了病毒颗粒，然后分部收集之。
等电聚焦 将初步纯化的病毒材料置于pH梯度介质中进行电泳，病毒与细胞碎片即按其等电点的不同而分开，并集中于不同的pH层中，然后分部收集。
红细胞吸附和释放 许多能与红细胞发生凝集的病毒，可以在适当的酸碱度范围内，用适宜的动物红细胞吸附，以冷生理盐水洗涤红细胞表面后，用原体积的1/10～1/100的缓冲盐水在适宜的温度下洗脱。根据实验要求的不同，最后再用柱层析、pH梯度电泳或密度梯度离心纯化之。
硫酸铵沉淀法 先用20～30%的硫酸铵沉淀除去部分杂蛋白后，再将硫酸铵的浓度加到50～60%，大部分病毒即可沉淀下来。须反复数次。最后再用高速离心沉淀或柱层析纯化之。用这个方法，病毒的损失较大。
聚乙二醇沉淀法 分子量为6000道尔顿的聚乙二醇可用来浓缩纯化正粘病毒、副粘病毒及披膜病毒等。在病毒悬液中加入聚乙二醇到最终浓度为6～10%，搅拌均匀后在冷室中(4℃) 放置过夜，往往可以将病毒沉淀下来。最后再用离心或柱层析纯化之。
酶处理纯化 有时病毒颗粒与细胞成分连结比较紧密，用一般离心或层析不容易分开，可先用适当浓度的胰酶或糜蛋白酶处理分离细胞蛋白，及用DNA酶或RNA酶除去污染的细胞RNA或DNA，然后再进行高速离心，层析或用上述其他方法提纯之。
其他方法 其他如血清学方法、鱼精蛋白沉淀法、酸沉淀法和有机溶剂沉淀法，对某些病毒的浓缩提纯也有效。