病毒性肝炎的基因诊断gene diagnosis of virus hepatitis

(1) PCR法：
❶引物设计：一般根据肝炎病毒基因的保守区来设计引物。如HBV可据其C、S、P、X基因中的高度保守区来设计引物；HCV则通常用5′-NCR区设计的引物来扩增，该区引物阳性率达90%。HDV-RNA易形成二级结构，会影响扩增效率，可用较高温度破坏RNA的二级结构，并在一定温度下进行逆转录，所应用的PCR引物最好根据ORF5区3′端的序列来设计。
❷方法选择：除HBV外，HAV、HCV、HDV、HEV都是RNA病毒，采用RT-PCR^*法进行检测，为提高检测的灵敏度可采用巢式PCR^*方法。定量检测HCV-RNA，也可采用竞争性PCR^*和分支DNA^*(bDNA)检测法。
❸扩增产物分析：采用琼脂糖凝胶电泳来分析扩增产物；采用限制酶谱分析法^*、点杂交法、Southern印迹法^*等可提高特异性或灵敏度。(2) 核酸分子杂交法：可采用与病毒RNA互补的cDNA探针^*进行斑点杂交来直接检测血清中的病毒基因组。(3) DNA芯片^*技术：制备各型肝炎病毒的基因探针固化在支持物上制成肝炎基因芯片。通过一次杂交即可对各型肝炎进行筛查，可同时分析大量的样品，对疾病作出早期诊断。