男性生育力的免疫学检查

对抗精子的自体免疫反应是男性不育的一个病因。不育症患者体内常存在一类抗精子抗体。包括： 精子凝集抗体和精子制动抗体，前者会自发性造成精子凝集，后者却会使精子丧失活动能力。精液浆标本测定显示这类抗体属于IgA、IgG等免疫球蛋白。有些研究还认为精子制动抗体是一种补体依赖性抗体，要有某种补体的存在而发生作用，IgG型抗体就具有这种特性。
抗精子抗体的产生与输精道阻塞、睾丸损伤和炎症、附睾和附属性腺的感染等因素有关，这类病例抗精子抗体的发生率显著增高。因此，从免疫角度测定抗精子抗体，也是判断男性生育力的一种方法。不过各种生育力的免疫学检查方法，都非特异性，因为男性不育症的原因很多，其中免疫不育者，这类检查可呈现阳性反应。但不属免疫不育者，甚至正常人有时也会出现阳性结果，这可能是存在于血清内的一些非精子抗体因子造成，例如： 细菌、病毒等，所以应该与其他生育力的检查方法配合应用，常用方法如下：
精子凝集试验 是测定血清内的精子凝集抗体。
(1) 明胶凝集法(Kibrick法):
❶被测者血清标本先加热(56℃)处理30分钟，以破坏血清中补体，因未经加热处理的血清，在凝集发生前，可能会发生强烈的精子制动作用而杀灭精子。
❷用作试验的新鲜精液标本，以Bakers缓冲液稀释到4千万精子/ml浓度。
❸以10%明胶溶液等量地与上述精子稀释液混合，制成精液-明胶合剂。
❹以0.2～0.3ml 1:4～1:16不同稀释浓度的血清与等量的精液-明胶合剂混合，37℃孵化1～2小时以观察结果。
不育症患者，施行这种试验，通过明胶介质的帮助，在试管上部即可见到悬浮的白色精子凝集团。这种方法的优点是操作简单、观察方便，缺点是需要较多量的血清与精液标本，而且不能观察精子凝集的类型。
(2) 试管-玻璃片凝集法(Franklin Dukes改良法):被测血清经加热(56℃)处理30分钟。用作试验的精液标本以Bakers缓冲液稀释精子到5千万/ml浓度，以上述稀释血清0.5ml与0.1ml稀释精液，于试管内混合，37℃下孵化，间隔1、2或4小时，于接近试管底部取一滴混合液，置于玻片上，显微镜下观察精子凝集情况。凝集精子的类型(头对头凝集，头对尾凝集等)。 活动精子10%发生凝集认为是阳性结果。
精子制动试验(Isojima法) 是测定血清中精子制动抗体的存在，需依赖血清中补体才能限制精子活动。被测血清标本先经加热(56℃)处理30分钟，用于试验的新鲜精液标本，用Bakers缓冲液稀释到4千万精子/ml浓度，以上述稀释精液0.025ml，滴入置有0.25ml被测血清的试管中，并另加补体0.05ml,37℃下孵化1小时，孵化结束时，将试管轻微摇动，取一滴混合液于玻片上，作显微镜检查，以观察活动精子的百分数。同时需用不含精子制动抗体的正常人血清标本作对照研究。结果判断以精子制动值(SIV)计算，公式如下：

如果SIV≥2，精子制动试验为阳性。
抗体标记试验 这类方法的主要原理是采用荧光素标记抗体，以测定血清内抗体免疫球蛋白。
(1) 间接免疫荧光法(Hjont-Hansen改良法):以志愿供者的精液0.2ml加入生理盐水10～12ml中离心，取离心后的精子沉淀部份再置入生理盐水0.5ml。取一滴上述方法制备的精液标本作玻片涂片，并在空气内晾干30分钟后，用纯甲醇固定30分钟，再晾干后置入pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)内15分钟。用被测血清置于上述制备的玻片上，室温下孵化30～60分钟后，用PBS液漂洗三次，每次10分钟，再滴注附有人体免疫球蛋白抗血清的异硫氰酸荧光素盐酸盐(FITC)，室温下孵化后用PBS液漂洗三次，每次10分钟，荧光显微镜下观察结果。利用血清内的抗精子抗体可使精子不同部位呈现不同免疫荧光素反应这样一个特征，通常与正常血清对比研究，以判断精子抗体的存在情况。被测者血清内如存在抗精子抗体，则精子可以显示强烈的荧光素反应，反之，则不出现反应。
(2) 肿胀精子头部的间接免疫荧光法(Kolk法):这种径方法原理与上述间接免疫荧光法相同，不过所用的精液标本预先用胰蛋白酶等药物处理，造成精子头部肿胀，使以后与含精子抗体的血清接触后，更清晰地观察荧光素分布情况。
免疫球蛋白依附试验(Coomb法) 是把免疫球蛋白预先人为地吸附在绵羊红细胞上，再将这种特制的红细胞试剂与被测者的精液接触，要求精液稀释配制成7千万/ml的浓度，然后在位相显微镜下观察精子是否会与这类红细胞互相依附。发生依附者表示精子会与免疫球蛋白产生结合反应，提示这类精子足以使人体产生抗精子抗体。相反，不发生依附者，精子不与免疫球蛋白结合，也即是不足以产生抗精子抗体。