沉淀反应

各种可溶性抗原(如体液中的唾液、精液、组织液、血清、白蛋白等)与相应的抗体结合，在有适当电解质存在的条件下：经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物的过程。发生沉淀反应的抗原称沉淀原，其抗体称沉淀素。沉淀反应是法医学物证检验的重要实验方法。常用的沉淀反应有环状沉淀反应、琼脂糖板扩散试验、对流免疫电泳、免疫电泳、电免疫扩散等方法。沉淀反应主要用于测定生物体的蛋白种属和多态性。

沉淀反应

可溶性抗原与相应体结合后，在适量电解质存在下，经过一段时间形成肉眼可见的沉淀物的现象。反应速度及反应物的量取决于抗原抗体量的相互关系。由于沉淀反应的抗原比相应抗体分子小，因此，单位体积所含的抗原量多，为了避免抗原过剩，一般在测定前将抗原稀释，而不稀释抗体，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。由于抗原抗体反应是十分特异的，法医学上常用于鉴定血迹。主要的试验有： 环状沉淀反应，琼脂扩散
反应，免疫电渗电泳等。

沉淀反应precipitation reaction

当抗原为可溶性物质(如毒素、细菌培养滤液、血清等)与其相应抗体混合，在有电解质参加下，便有肉眼可见的沉淀物出现，这种现象叫做沉淀反应。沉淀反应的原理和影响因素与凝集反应相同。不过凝集反应中抗原是比较大的颗粒悬液，而沉淀反应中抗原则是极细微的胶体溶液；凝集反应中，凝集块主要由抗原形成；而沉淀反应中，沉淀物主要由抗体形成。

沉淀反应

可溶性抗原(如细菌浸出液、组织浸出液、动物血清、白蛋白等)与相应的抗体结合，在有适量电解质存在的条件下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。这种现象称为沉淀反应。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。同相应抗体比较，抗原的分子小，单位体积内所含的抗原量多，由于沉淀物主要是通过抗体球蛋白将抗原分子交叉连接起来而形成的，因此为了保证有足够的抗体，一般在测定时稀释抗原，而不稀释抗体。并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。由于抗原抗体反应是十分特异的，因此可广泛应用沉淀反应技术来鉴定混合系统的蛋白组分，鉴定菌型，诊断疾病，以及在法医学上鉴定血迹等。主要的试验有： 环状沉淀反应，用于抗原的定性试验； 絮状沉淀反应，用于毒素、抗毒素的测定等； 凝胶扩散试验，应用较广，可测定免疫球蛋白、补体各成分的含量，分析和鉴定复杂的抗原物质成分，测定抗体、抗原提取的纯度等。
环状沉淀反应 也称环状试验。在小口径试管内先加入含已知抗体的血清，然后小心加入待检抗原于血清表面，成为分界清晰的两层。数分钟后，两层液面交界处出现白色沉淀环的为阳性反应。本试验用于抗原的定性试验，应用范围较广，如用于食品检验、考古及法医学等方面。在法医学中对可疑犯罪案中的血迹，用生理盐水浸泡，取浸泡液作为抗原，选用抗人或抗其他动物血清蛋白的抗血清，分别进行环状沉淀反应。若抗原只与抗人血清蛋白的抗体形成沉淀，说明血迹来源于人血。由于近年已知的血型抗原很多，若使用抗血型抗原的特异性抗血清，能更进一步查出血迹的血型。这种试验在法医学血迹鉴定上极为常用。应用这一原理也可鉴定古尸血型。
絮状沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体以一定比例在清澄透明的含电解质液体中结合，凝聚成絮状或颗粒状的悬浮物，由清澄变为混浊，称絮状沉淀反应或絮状反应。例如用已知单位的标准抗毒素与未知量的相应毒素在试管内反应可测定该毒素的含量，反之亦然。絮状物如果量多了或放置时间久了都会变成沉淀，因此其本质仍为沉淀反应。
凝胶扩散试验 利用可溶性抗原与抗体在半固体凝胶内进行扩散，当抗原与抗体相对应，且二者比例适合时，就出现白色沉淀线，是为阳性反应。本试验可分为单向扩散和双向扩散两类。均可在试管、平皿或玻片上的凝胶中进行。可对单一的、复合的以及多个的抗原抗体系统进行定性分析或定量测定。常用琼脂或琼脂糖作凝胶，也可用聚丙烯酰胺、明胶和果胶等作凝胶。
单向环状扩散试验 也称单向环状免疫扩散，是一种常用的定量测定抗原的方法。一般是将单价抗血清在含有电解质的凝胶中混匀铺在玻片上，成一厚薄均匀的凝胶板，然后在板上打孔，加入等量不同稀释度的工作标准（即已知抗原），同时在其余孔中加入检测标本 （未知抗原），在一定温度和湿度下，经一定时间扩散后，孔周围形成肉眼可见沉淀环。沉淀环的直径或面积与抗原含量成正比，与抗体浓度成反比。根据不同浓度工作标准的沉淀环绘制标准曲线，按检测样品沉淀环大小，从标准曲线中查出其含量。目前一般用于血清蛋白和各种体液中免疫球蛋白含量的测定。

单向环状扩散试验示意图
抗体混在琼脂板中。上列为检测标本： 下列为不同稀释度的工作标准。

单向环状扩散试验标准曲线示意图

双向免疫扩散试验一般用于提纯样品的定性分析和混合系统的定性测定。根据试验目的可在含有电解质的凝胶板上打出各种排列的图形 (正方形、三角形、梅花形) 的圆形孔穴。分别加入抗原、抗体溶液，在一定温度和湿度下，经过一定时间扩散后，凝胶板中形成抗原抗体的浓度梯度。比例合适时，在相应的抗原抗体系统相遇处形成免疫复合物沉淀，即呈现肉眼可见的沉淀线，而各抗原抗体系统相互形成独立的互不干扰的沉淀线，因此可用于抗原抗体系统的定性分析。根据抗原抗体的浓度不同，在双扩散系统中出现的沉淀线位置、粗细不同，因此可在固定抗原（或抗体）浓度，稀释抗体（或抗原）浓度情况下用于半定量测定。

双向免疫扩散试验的不同情况左为一致性反应，中为不一致性反应，右为部分一致性反应。

抗原或抗体半定量测定
左： 以已知抗体 (Ab) 半定量测定不同稀释度的抗原，根据沉淀线出现到1/8为止，1/16未见有沉淀线，故效价为1/8。右： 以已知抗原(Ag) 半定量测定不同稀释度的抗体，根据沉淀线出现到1/16为止，1/32未见有沉淀线，故效价为1/16。

沉淀反应

precipitation