暗视野显微镜dark field microscope

通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光分辨样品细节的特殊显微镜，亦称超显微镜。暗视野显微镜的照明光线不直接进入物镜，视野背景黑暗，细节明亮，其分辨力远高于普通光学显微镜。
基本原理 普通光学显微镜，由于光波间的相互干涉，小于照射光1/2波长的细节不能分辨，但当斜射光束从侧面照射这些细节时，部分光线会发生散射，尤如细节本身发光。当照明光有足够的强度而背景又黑暗时，这些散射光便可通过物镜和目镜而被观察到，从而可以分辨出普通光学显微镜所不能分辨的0.004～0.2μm大小的细节。由于所观察的只是样品细节表面的散射光，因而只能观察到细节的轮廓而不能显示细节内部的细微结构。小于4nm的微小粒子，由于受斜射光照射时不发生散射现象，因此也不能分辨。
结构特点 与普通光学显微镜的最大区别是用暗视野聚光器代替普通聚光器。暗视野聚光器的种类很多，如抛物面聚光器、心形面聚光器、辉光聚光器、同心球聚光器等，它们的共同特点是用各种曲面反射照明光线，最后让光线在聚光镜的顶端斜向射出，聚焦照射样品，照明光线不直接进入物镜。抛物面聚光器的照明光线是从周围进入聚光器，被抛物面反射后光线斜向照射样品。
不同的暗视野聚光器对物镜镜口率的要求不一，一般要求小于0.85，以保证斜向照明光线不进入物镜。在暗视野聚光镜与载玻片之间须滴上香柏油，否则照明光线于聚光镜顶端表面发生全反射而不能照明样品。
应用 能分辨普通光学显微镜所不能分辨的细节轮廓，常用于活细胞的观察，如研究细胞的运动、分泌、鞭毛及纤毛的摆动、细胞器及颗粒物质在细胞内的分布等； 对细菌、真菌及某些原生生物进行鉴定或对其生命运动特点进行研究； 结合显微灰化技术，可以研究无机盐在细胞内的分布。

暗视野显微镜darkfield microscope

通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光，分辨样品细节的一种特殊光学显微镜。与普通光学显微镜唯一区别之处是用暗视野集光器代替常规集光器。使照明光线不直接进入物镜而斜向照射被检物体，引起反射，这样视野的背景黑暗而物体明亮。这种暗视野映光法能观察普通光学显微镜所无法看到的直径小于0.2μm的小物体，如螺旋体等，但不能分辨被检物的详细结构。

暗视野显微镜dark field microscope

由光学显微镜换上暗视野聚光器而成。其视野呈黑色，被观察物体因折光而发亮，非常醒目。用于检查螺旋体和细菌运动。

暗视野显微镜

暗视野显微镜备有特殊的集光器使光线斜射向被检物体，不直接进入物镜和目镜，物体表面所反射和衍射的光，通过显微镜放大而形成明亮的象，视野则全部黑暗.暗视野所检查的物体都是微小的颗粒，如金胶粒、血浆中的乳糜粒等，由它们的光亮和运动而识别。暗视野显微镜下可观察到0.004μm以上微粒的存在，比普通显微镜的分辨率大为提高，但不能分辨微粒的内部结构。暗视野聚光器种类很多，生物学和医学中常用的是抛物面型聚光器（见图）。该聚光器是使抛物面的焦点会聚在聚光器上面被检物位置上，透镜下面设有中央光档，由下面射入的照明光线不进入镜筒内，只有被检物的散射光进入物镜，这样就形成了暗视野。暗视野显微镜可观察生活细胞内的线粒体、液体介质中的细菌、酵母菌和霉菌等。

暗视野显微镜光路示意图

1.中央光档 2.入射照明光线

暗视野显微镜darkfeild microscope

细菌形体小且半透明，未经染色时与周围对比不明显，因此，在普通光学显微镜下不易看到。将显微境装上特制的暗视集光器。集光器中央不透光，光线不能直接向上进入镜筒，故背景黑暗无光。从集光器边缘部分斜射而上的光线集中到标本部位，经菌体散射而进入物镜，在黑暗的背景上便可看到发亮的菌体，从而提高了观察的效果。此法称暗视野映光法，多用于检查不染色的活细菌和螺旋体。

暗视野显微镜

dark-field microscope